Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Киршвинк Дж. -> "Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1" -> 95

Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 - Киршвинк Дж.

Киршвинк Дж., Джонса Д. Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 353 c.
ISBN 5-03-001274-5
Скачать (прямая ссылка): biogenniymagnetit1989.djvu
Предыдущая << 1 .. 89 90 91 92 93 94 < 95 > 96 97 98 99 100 101 .. 150 >> Следующая

данном случае продолжать работу не имеет смысла, поскольку на поверхности такой сетки удержится мало частиц, а те, которые сохранятся, будут агрегированы и плохо распределены. Лучше подвергнуть сетки действию светящегося газового разряда и начать все сначала.
Иногда полезен другой способ нанесения образца на сетку, в особенности когда нужно избежать слипания магнитных частиц. (Следует отметить, что если магнитные частицы реагируют с большой скоростью, то они либо слишком сконцентрированы, либо чрезмерно велики для непосредственного изучения с помощью просвечивающего электронного микроскопа; в этом случае необходима дополнительная обработка образца.) Эта методика предусматривает помещение суспензии образца в стеклянный распылитель и-сразу после ультразвукового диспергирования-нанесение на сетки микрокапелек суспензии, которые быстро высыхают. Стеклянные распылители для этой цели можно приобрести через торговые организации, поставляющие оборудование для электронной микроскопии.
2.5. Оттенение и получение реплик
Недостатком просвечивающего электронного микроскопа, позволяющего достигать очень высокого разрешения, является то, что в обычных условиях он не дает легко интерпретируемой картины образца. Современный сканирующий электронный микроскоп в очень большой степени восполнил этот пробел. Он позволяет выявлять трехмерную картину большинства объектов и особенно пригоден для малых и средних увеличений. Однако время от времени появляются работы, в которых очень мелкие частицы коллоидных размеров исследуют на пределе возможностей сканирующего электронного микроскопа. В тех случаях, когда требуются более высокое разрешение и более точная идентификация, может быть полезен просвечивающий электронный микроскоп, если применять метод, известный как оттенение. С помощью этого метода создается впечатление трехмерности изображения.
Методика оттенения детально описана в большинстве публикаций по общим вопросам электронной микроскопии. По существу она включает в себя вакуумное напыление тяжелых металлов (золота, платины, хрома) из точечного источника под углом к поверхности образца, уже высохшего на подложке. Металл, осаждаясь на одной поверхности и образуя тень за другой, создает при наблюдении в электронный микроскоп впечатление глубины. Если известен угол оттенения, то высота оттененного материала может быть вычислена при помощи тригонометрических функций. Когда требуется более точное знание размеров, для определения истинной величины угла оттенения можно использовать внутреннюю калибровку. При этом к суспензии частиц добавляют небольшое количество калибровочных шариков известного размера из полистиролового латекса, по которым считывают угол оттенения. Такие шарики имеются в продаже.
Для образования четких теней и мелкозернистого металлического покрытия необходимо, чтобы до начала напыления металла был достигнут высокий вакуум. Методика оттенения может быть особенно полезна для определения формы и размеров очень тонких чешуек и волокон, которые для улучшения их видимости оттеняют под очень малыми углами. Наблюдение очень мелких частиц (< 100 А) могут осложнять артефакты, создаваемые зернистостью металла, нечеткостью теней и образованием «шубы». Результаты таких опытов следует оценивать с осторожностью.
Появление новых сканирующих электронных микроскопов с более высоким разрешением привело к тому, что трудный и требующий больших затрат времени метод одноступенчатых реплик, используемый для выявления топографии поверхности, стал считаться едва ли не устаревшим. Хотя с помощью этого метода по-прежнему можно получать контрастные и четкие микрофотографии при высоких увеличениях, его применяют все меньше из-за трудоемкости связанных с ним операций. Кроме того, существует опасность разрушения образца. Совершенно очевидно, что в тех случаях, когда основной целью является получение информации о топографии поверхности, более предпочтителен сканирующий электронный микроскоп. Заслуживает упоминания одно исключение: по-видимому, замораживание-скалывание и замораживание-травление биологической ткани лучше проводить с помощью получения реплик. Тем, кто интересуется этим вопросом подробно, следует обратиться к специальным публикациям.
2.6. Методы подготовки тканей
Исследователю, изучающему связанные с тканью минералы биогенного происхождения in situ с помощью просвечивающего электронного микроскопа, приходится иметь дело с инструкциями, в которых подробно описаны способы подготовки тканей. В задачи этой главы не входит даже беглое обсуждение огромного числа способов обработки, фиксации, заливки, резки, окрашивания и перенесения срезов на сетки. Читателю, интересующемуся данными вопросами, целесообразно изучить последние руководства, описывающие эти разнообразные процедуры, и посоветоваться с работающими в данной области специалистами.
В связи с этим полезно высказать несколько предостережений. Обычные «нормальные» способы приготовления большинства образцов биологической ткани для просвечивающей электронной микроскопии часто специально предназначены для биологических или биохимических целей, далеких от целей исследования минеральных материалов. Тот, кто в первую очередь изучает локализацию и идентификацию биогенных магнитных (или немагнитных) минеральных материалов, должен, по крайней мере на начальных стадиях исследования с помощью просвечивающей электронной микроскопии, поставить во главу угла именно эту задачу, а не заботиться о сохранности клеточных структур ткани.
Предыдущая << 1 .. 89 90 91 92 93 94 < 95 > 96 97 98 99 100 101 .. 150 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed