Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Киршвинк Дж. -> "Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1" -> 93

Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 - Киршвинк Дж.

Киршвинк Дж., Джонса Д. Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 — М.: Мир, 1989. — 353 c.
ISBN 5-03-001274-5
Скачать (прямая ссылка): biogenniymagnetit1989.djvu
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 150 >> Следующая

взаимодействовать с ним. Один из способов выделения заключается в том, что образцы оставляют в отбеливателе на несколько часов после предварительной ультразвуковой обработки. Затем помещают пробирки в клиническую центрифугу, и нерастворенный материал отделяют в виде осадка. После того как неорганический материал осажден, к нему добавляют свежий отбеливатель и вновь взбалтывают осадок при помощи ультразвуковой вибрации. Этот процесс повторяют до тех пор, пока большая часть органического вещества не окажется растворенной. Обработанные отбеливателем частицы промывают дистиллированной водой, применяя такое же чередование растворения в воде, осаждения и последующего суспендирования до тех пор, пока отбеливатель не будет в основном удален.
Как и при всякой обработке, здесь возможен ряд осложнений. Во-первых, для улучшения растворения органического вещества нельзя применять нагревание из-за большой вероятности сопутствующих этому изменений минерального состава и(или) кристалличности выделяемого неорганического материала. Во-вторых, продолжительность этапов центрифугирования должна быть достаточной, для того чтобы большая часть даже самых мелких минеральных частичек могла достичь дна пробирки. Это можно грубо оценить, помещая пробирки перед источником света. Если жидкость прозрачна, и эффект Тиндаля не обнаруживается, значит, большая часть материала осаждена. В-третьих, следует учитывать возможность изменения минеральных фаз под действием отбеливателя. Существует потенциальная опасность окисления части восстановленного железа в магнетите, но опыт показал, что это происходит редко. Исследование таких образцов до и после интенсивного воздействия отбеливателя методом дифракции рентгеновских лучей не обнаружило образование новых минеральных фаз. Тем не менее исследователь, возможно, пожелает убедиться сам, что такого рода изменения отсутствуют. И в-четвертых, еще одно предостережение: окисление органического материала хлорным отбеливателем в некоторых случаях может приводить к выделению железа, находящегося в организме в хелатированном или другом неминерализованном состоянии. Это железо может гидролизоваться в дистиллированной воде с образованием коллоидных водных оксидов железа, отсутствующих в обычных условиях. Хотя не зарегистрировано ни одного случая такого артефакта, при любом способе выделения минеральных частиц с использованием окисления органического материала потенциальная возможность такой ошибки не исключена.
Когда минеральный материал выделен и освобожден от органических примесей, он фактически готов для исследования. Поскольку просвечивающая электронная микроскопия имеет определенные ограничения в отношении толщины образца, необходима дальнейшая обработка материала для удаления крупных зерен. Образцы толще ~ 0,1 мкм редко дают в электронном микроскопе что-либо, кроме силуэтного изображения, причем это зависит от среднего атомного числа исследуемых
элементов и их кристаллографического окружения. Поэтому в таком образце можно исследовать только минеральные частицы меньшей величины. Грубозернистые препараты лучше исследовать при помощи сканирующей электронной микроскопии, в отраженном свете или с применением реплик.
2.3. Изготовление подложек для образцов
При исследовании в просвечивающем электронном микроскопе образцы помещают на соответствующие подложки. Обычная процедура, описанная в руководствах, состоит в нанесении капли диспергированных частиц на держатель образца-сетку-подложку или другое какое-либо приспособление с небольшими отверстиями, затянутыми очень тонким бесструктурным и проницаемым для электронов субстратом.
Сетки для образцов весьма различаются по виду металла и величине ячеек. В большинстве случаев для диспергированных частиц подходят медные сетки типа «Афина» диаметром 3 мм, имеющие мелкие ячейки с четкими очертаниями. Достаточной является решетка из 200-300 ячеек. Сетки с крупными ячейками, щелевидные или овальные бленды более пригодны для сверхтонких срезов или реплик, но меньше подходят для диспергированных частиц из-за повышенной вероятности смещения образца и повреждения субстрата в электронном микроскопе.
Каждая сетка должна быть покрыта подложкой. Для этого имеется несколько возможностей, но наиболее распространенной является тонкая коллодиевая (нитроцеллюлозная) пленка, покрытая тонким слоем напыленного углерода.
В большинстве руководств описываются разные способы изготовления таких тонких пленок. Одним из простейших методов достижения однородности тонких пленок является метод капли, растекающейся под действием силы тяжести. По этой методике сначала готовят чистый раствор, содержащий около 1% (по весу) парлодия в амилацетате. Большой стеклянный кристаллизатор заполняют дистиллированной водой, ставят в центре его блок-подставку и кладут на нее медную (или из другого нержавеющего материала) пластинку таким образом, чтобы она находилась под самой поверхностью воды. Затем на пластинку осторожно помещают по отдельности медные сетки. После укладывания всех сеток в кристаллизатор медленно доливают воду до тех пор, пока не образуется мениск. Частицы пыли с поверхности мениска удаляют чистой стеклянной палочкой. На чистую поверхность воды наносят маленькую каплю исходного раствора парлодия. После того как амилацетат улетучится (это должно занимать всего несколько секунд), на поверхности воды остается тонкая пленка пластикового покрытия. Затем воду из кристаллизатора отсасывают при помощи сифона, позволяя пленке осесть на сетках. (В некоторых лабораториях пользуются специальными стеклянными чашками с нипельным отверстием в основании для удаления воды без отсасывания с помощью сифона.) После того
Предыдущая << 1 .. 87 88 89 90 91 92 < 93 > 94 95 96 97 98 99 .. 150 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed