Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 - Киршвинк Дж.
ISBN 5-03-001274-5
Скачать (прямая ссылка):
Прежде всего необходимо отметить, что, хотя работа электроннооптической аппаратуры является важной, залогом успеха электронномикроскопического исследования служит хорошая подготовка образца. Самое лучшее оборудование в мире не сможет компенсировать плохое изготовление образца; если же образец для электронного микроскопа был подготовлен хорошо, это означает, что больше половины дела уже сделано.
2.1. Предварительное исследование образца
Казалось бы, прежде чем подготавливать образец для электронной микроскопии, его надо предварительно всесторонне исследовать, но обычно обращают внимание лишь на те особенности образца, которые могут оказаться существенными для применяемой методики, или же интересуются тем, что, может быть, окажется важным позднее. Исследователю необходимо затратить время на изучение объекта при меньшем увеличении, прежде чем он столкнется лицом к лицу с проблемой поиска «иголки в стоге сена», которая часто возникает при просвечивающей электронной микроскопии с большим увеличением. Итак, вначале следует проанализировать физические и химические свойства каждого образца и ответить на ряд вопросов. Ниже приводится список этих вопросов, хотя известно, что на многие из них нельзя ответить даже в идеальном случае.
1. Можно ли с помощью светового микроскопа различать минеральные компоненты? Если да, то почти наверняка их слои слишком толстые, чтобы пропускать электроны, и использование просвечивающей электронной микроскопии может быть даже ненужным.
2. Не присутствует ли в образце несколько неорганических компонентов? Если это так, то могут возникнуть трудности при их различении в черно-белом мире электронной микроскопии. Неясности могут появляться и при анализе картин электронной дифракции.
3. Уверены ли вы в том, что имеющегося у вас материала достаточно для проведения более чем одного анализа? Другими словами, не окажется ли анализ образца методом просвечивающей электронной микроскопии однократной операцией? Если это так, то, по-видимому, не имеет смысла использовать этот метод, пока не появится больше данных о природе образца, полученных иным путем.
4. Говорят ли другие аналитические методы что-либо о минеральном составе или величине частиц, что может оказаться полезным при
подготовке образца? Например, свидетельствуют ли данные дифракции рентгеновских лучей о том, что исследуемые компоненты являются кристаллическими, но с очень малой величиной кристаллов, т. е. обнаруживаются ли в картине Дебая-Шеррера признаки уширения линий?
5. Были ли проведены поиски посторонних загрязняющих частиц и были ли они удалены из образца, чтобы избежать возможности ошибочного толкования результатов?
Ответы на эти и связанные с ними вопросы заложат основы планирования подготовки образца для просвечивающей электронной микроскопии. Чем больше известно об образце заранее, тем легче и продуктивнее будет, по-видимому, электронно-микроскопическое исследование.
2.2. Выделение и разделение минеральных фаз
Если предварительное исследование образца указывает на возможность выделения неорганических фаз, то первым этапом приготовления пробы мелкодисперсного материала является удаление из организма минеральных частиц и возможно более полная очистка их от налипшего органического материала. Вообще если можно как-то отделить минеральные фазы от посторонней ткани путем препарирования, то полезно проделать это. Если минеральный материал встречается в макроскопической концентрированной форме, как, например, в случае магнетита зубцов у некоторых морских хитонов, то этот минерал сперва можно выделить физическими и механическими способами. Полезно провести тщательное препарирование с помощью пинцетов и игл из немагнитного материала, а также сбор образца при помощи тонкой кисточки из верблюжьей шерсти.
Однако с рассеянными минеральными частицами, такими как у обладающих магнитотаксисом бактерий, нельзя поступать подобным образом. В этом случае необходима разработка других методик. Оказалось успешным совместное использование двух приемов: химического растворения органического вещества и ультразвуковой обработки раствора для уменьшения агрегации. Обычно используют чистые пробирки емкостью 5 мл от клинической центрифуги. Берут четное количество пробирок с небольшим приблизительно одинаковым количеством изолированных тканей или микроорганизмов. Затем каждую пробирку заполняют примерно на 2/3 имеющимся в продаже хозяйственным отбеливателем (5,25%-ным раствором гипохлорита натрия). Неодинаковое количество жидкости с тканью в пробирках приведет к разбалан-сировке центрифуги, чего следует избегать. Если образец содержится в одной-единственной пробирке, то для ее уравновешивания нужно взять другую с соответствующим количеством воды. Затем центрифужные пробирки помещают в заполненную водой ванночку ультразвукового вибратора и обрабатывают ультразвуком в течение нескольких минут. Отбеливатель прореагирует с белковоподобным материалом довольно быстро, а с углеводным-либо более медленно, либо вообще не будет
