Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
Нормальные Fx (нехи А 54 400 1,32
мерные) Q 41 100
Нормальные А (нехимер --- А 83 610 25,11
ные) Q 3330
Нормальные Q (нехимер --- А 4960 0,06
ные) Q 77 610
Q (к. м.) -*¦ Fx (обл.) 12 мес А 6110 0,06
Q 96350
Q (к. м.) -*¦ Fx (обл.) 4 нед А 47 240 0,78
Q 60 850
Q (к. м.) -*¦ Fx (обл.) 6 нед А 13160 0,25
Q 54 610
Q(k. м.) -v Fx (обл.) 15 нед А 7600 0,11
Q 68 220
I) Облученные нормальные или повторно облученные химерные Pj (к. м.) -*• Ft (обл.) животные были использованы как источник антиген-презентирующих клеток для первичной иммунизации БЭ нормальных Т-клеток гибридов Fi. Затем определили хелперную активность этих иммунных клеток по отношению к В-лимфоцитам и макрофагам (обработанные антителами против Thy-i и комплементом клетки селезенки) линии А и линии Q. Определяли уровень ответа непрямых (IgG) БОК и вычисляли отношение числа БОК при кооперации с В-лимфоцитами и макрофагами линии А и линии Q (последняя колонка).
Химерных мышей повторно облучали (850 Р) через различные сроки после введения костного мозга, а затем им вводили Т-клетки мышей и антиген. Спустя
5 дней получали Т-клетки из грудного лимфатического протока и определяли хелперную активность по отношению к В-лимфоцитам (и макрофагам) линий Рг и Р2.
Как видно из табл. 15.32, нормальные Т-клетки Fj (А х Q) с одинаковой эффективностью кооперировали с В-лимфоцитами линий А и Q. В отличие от этого Т-клетки гибридов Flt которые иммунизировали в 12-месячных химерах-реципиентах Q (к. м.) —>- Fx (А х Q) (обл.), преимущественно взаимодействовали с В-лимфоцитами линии Q (отношение 0,06). Этот результат неотличим от данных, полученных с использованием нормальных мышей линии Q в качестве иммунизируемого реципиента, и свидетельствует о том, что все АПК однолетних (12-месячных) химер представлены клетками донора линии Q. Кинетические исследования выявили постепенный обмен клеток, при котором АПК реципиентов Fj за 3—4 месяца замещаются АПК донорской линии Q. Таким образом, в отличие от органов, подобных селезенке, где оборот (обновление) АПК оказался очень быстрым, во многих частях тела оборот АПК происходит более медленно. Тем не менее во время проведения большинства функциональных исследований радиационных химер (3 месяца) подавляющее большинство АПК представлено клетками, происходящими из костного мозга донора.
Однако те случаи, когда оборот АПК не завершался к моменту исследования, возможно, объясняют расхождение данных экспериментов с химерами Рх (к. м.) -> Fx (обл.). Такие факторы, как доза облучения и линейные различия, могли влиять на скорость оборота АПК. Это позволило выявить рас-
познавание MHC-молекул линии Р2 (расширенный репертуар) в некоторых случаях, когда во время иммунизации присутствовало достаточно АПК гибридов Fx. Следует отметить, что вся эта проблема вообще снимается при определении первичного ответа in vitro, как, например, при цитотоксическом тесте на ТНФ-модифицированных клетках селезенки, поскольку здесь АПК каждого гаплотипа представлены во время сенсибилизации, и, следовательно, результаты анализа не зависят от АПК облученного реципиента. Подобным образом можно преодолеть проблему АПК химер Рх (к. м.) Fx (обл.) даже при вторичном ответе, вводя АПК от Fx или Р2 (т. е. облученные клетки селезенки) на сроках иммунизации и во время рестимуляции in vitro. С помощью таких манипуляций едва ли не всем исследователям, даже при иммунизации химер, удалось показать, что популяция клеток химер Рх (к. м.) -v Fx (обл.) способна распознавать антиген в окружении МНС-молекул и Р2.
Одна современная гипотеза, появившаяся в результате исследований скорости оборота АПК, заключается в предположении, что клетка, которая «обучает» Т-лимфоциты МНС-рестрикции, происходит из костного мозга, а не из тимуса. Оборот клеток тимуса, которые презентируют антиген пролиферирующим Т-клеткам, был исследован в тимусе химер Fx (к. м.) -*¦ Рх (обл.) и Pj (к. м.) —Fj^ (обл.). Как было установлено, оборот АПК занимал от 2 до
4 месяцев. Если для удаления зрелых Т-клеток из периферических лимфоидных органов химер Fj (к. м.) -+¦ Pj (обл.) ввести антитимоцитарную сыворотку (АТС) и кортизон-ацетат в момент, когда периферические Т-клетки химер рестриктированы по молекулам МНС реципиента Рг, а тимические АПК заменены экспрессирующими MHC-клетками гибридов Flt то новое поколение Т-клеток, созревшее впоследствии, не будет рестриктировано исключительно по MHC-молекулам Рх. Наоборот, они будут вести себя подобно Т-клеткам гибридов Fx. Эта корреляция между типом АПК костномозгового происхождения, присутствующих в тимусе, и специфичностью рестрикции Т-клеточной популяции, мигрирующей на периферию, указывает, что клетка костномозгового происхождения может быть саморестриктирующей или самообучающейся клеткой. Дальнейшие эксперименты Лонго и Дэвиса по изучению влияния дозы облучения на оборот тимусных АПК подтверждают эту гипотезу. Облучение реципиентов Рх в высокой дозе (1200 рад) приводило к появлению в тимусе АПК гибридов Fx уже через 3 недели после облучения. В этом случае Т-клетки химер рестриктированы не только по молекулам МНС реципиента Рх. Однако попытки Цинкернагеля [58] распространить эти наблюдения на системы цитотоксических Т-лимфоцитов оказались неудачными. При этом химеры Fi (к. м.) Pj (обл.) сохраняли фенотипическую рестрикцию по молекулам МНС реципиента Рг даже после удаления зрелых Т-клеток с помощью АТС и (или) кортизон-ацетата. Эти результаты не обязательно противоречат данным опытов с использованием пролиферирующих Т-клеток, поскольку клетка, рестриктирующая ответ по молекулам МНС класса I, может быть тимусного происхождения, а клетка, рестриктирующая ответ по молекулам МНС класса II,— костномозгового происхождения.
