Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
1 Наконец, тщательное количественное исследование аллореактивности бьиш выполнено с использованием анализа in vitro, например в реакции смешанной культуры лимфоцитов, результаты которой определяли в условиях лимитирующих разведений клеток. Если клетки селезенки одной линии мышей (отвечаю-| щие клетки) смешивали с облученными аллогенными клетками селезенки другой линии мышей (клетки-стимуляторы), то индуцировалась пролиферация Т-кле-ток первой популяции на антигены МНС второй популяции. Частоту отвечаю-| щих клеток можно определить, культивируя различное число отвечающих клеток с постоянным, большим количеством клеток-стимуляторов. Такие культуры ставятся в большом количестве параллельных проб, и для каждой дозы отвечающих клеток определяется число повторов, дающих положительный ответ. Если ответ определяется одним типом клеток, то распределение отвечающих | клеток описывается распределением Пуассона для вероятности редких событий:
* где (А — число клеток на культуральную лунку, / — частота отвечающих клеток и & — число отвечающих клеток в культуре. Вероятность отсутствия ответа задается этим уравнением при & = 0, т. е. когда в лунке нет отвечающих клеток. Отсюда вытекает: доля отрицательных лунок Р (0; nf) = e~^f. Зависимость
логарифма доли отрицательных лунок от числа клеток на лунку (fi) описывается прямой линией, наклон которой представляет отрицательную величину частоты отвечающих клеток (/) и которая должна пересекать 1 (все лунки отрицательные, fx — 0). Искомую частоту можно также получить из обратного значения числа клеток, которое дает 37% отрицательных лунок, поскольку если /= 1/р,, то Р= е~г = 0,37.
На рис. 15.14 представлены экспериментальные результаты анализа методом предельных разведений популяции клеток селезенки мышей C57BL/6 (Н-2Ь), отвечающей на облученные клетки селезенки мышей DBA/2 (Н-2d) [67].
Одна из 290 клеток селезенки C57BL/6 пролиферировала в ответ на аллоантигены мышей DBA/2. Если учесть, что в нормальной селезенке мыши Т-лим-
Рис. 15.14. Сравнение частоты предшественников аллореактивных пролиферирующих (ПТЛ) и цитотоксических (ЦТЛ) Т-лимфоцитов.
Клетки селезенки мышей C57BL/6 помещали в культуральные пластинки по 250 или 500 клеток на лунку. Каждая группа состояла из 40 параллельных микрокультур, стимулированных облученными клетками селезенки мышей DBA/2 (по 1-106 клеток на лунку). Через 7 дней отбирали аликвоты из каждой культуры и отдельно определяли пролиферативный ответ по включению 3Н-тимидина (светлые пружки) и цитотоксичность против меченных 61Сг опухолевых клеток-мишеней DBA/2 (темные кружки). Микрокультуры оценивали как отвечающие или неотвечающие и в логарифмической шкале строили зависимость доли (%) неотвечающих лунок от числа добавленных клеток селезенки мышей C57BL/6.
Прерывистыми линиями показана оценка частоты предшественников, основанная на распределении Пуассона (37% отрицательных лунок). (По [67].)
фоциты составляют 30%, то на долю отвечающих Т-клеток приходится 1,1%. Одновременно определяли и частоту цитотоксических Т-клеток, специфичных к аллоантигенам класса 1 мышей DBA/2 (рис. 15.14).Эта частота в данном эксперименте составляла одну клетку на 480. Среднее значение по пяти опытам равнялось 1 на 590 или было приблизительно в два раза ниже числа предшественников пролиферирующих клеток. Таким образом, каждая из двух различных популяций Т-клеток с разной функциональной активностью характеризуется высокой частотой аллореактивных клеток.
15.9.2. Теоретические модели
Как объяснить высокую частоту аллореактивных Т-клеток? Предложены три основные модели (рис. 15.15). В модели Ерне [68] предполагалось, что молекулы МНС Вызывают дифференцировку лимфоцитов, воздействуя на популяцию генетически детерминированных рецепторов, специфичных к данным MHC-молекулам. Модель предсказывала, что на лимфоциты, экспрессирующие рецепторы к «не-своим» молекула^ МНС, процесс селекции в тимусе не оказывает влияния и они появляются на периферии как аллореактивные Т-клетки. Таким
образом, согласно этой модели, аллореактивные клетки представляют собой субпопуляцию, независимую от Т-клеток, распознающих собственные молекулы МНС в сочетании с чужеродными антигенами. В отличие от этого многие другие исследователи того времени придерживались мнения, что все Т-клетки должны обладать по меньшей мере одним рецептором к аллогенным молекулам МНС, поскольку частота аллореактивных клеток очень высока, а число аллогенных гаплотипов крайне велико. Таким образом, вторая модель предсказывала, что на каждом лимфоците происходит экспрессия двух рецепторов, один из которых специфичен к аллоантигену, а другой — к чужеродному антигену. Наконец, когда феномен МНС-рестрикции начали рассматривать с точки зрения модели Т-клеточного рецепторного комплекса, специфичного к чужеродному антигену
МОДЕЛЬ 1
Независимые сувпопуляции
МОДЕЛЬ 2
Та же Т-клетка с независимыми рецепторами
МОДЕЛЬ 3
Та же Т-нлетка с перенрестно-реактивным(й) рецептором (рецепторам^
