Радиоиммунологические методы - Чард Т.
Скачать (прямая ссылка):
logit b = lg е^ 100-6
где Ь — доля меченого лиганда в связанной фазе, выраженная в процентах от его доли в нулевом стандарте. Во многих, если не во всех методах анализа (см. рис. 1.14), при построении графика зависимости этой величины от логарифма концентрации получают прямую линию. Такой график легко начертить от руки (для построения logit-графиков продается специальная бумага). Более важным является то обстоятельство, что эта величина легко может быть использована при составлении программ линейной регрессии наименьших квадратов для многих больших настольных калькуляторов, что в свою очередь позволяет полностью или почти полностью автоматизировать расчет результатов при помощи широко используемых программ. В связи с logit-преобразованием следует, однако, остановиться на некоторых практических моментах.
1) Прежде чем вычислять величину logit, необходимо вычесть из процента связывания величину холостой пробы. Если этого ие сделать, прямая линия не получится. Именно по этой причине методы анализа, для которых характерна высокая и сильно варьирущая холостая проба, часто плохо поддаются logit-преобразованию.
2) 10% начального и конечного участков калибровочной кривой при logit-преобразовании часто оказываются нелинейными, в связи с чем при расчете или вычерчивании преобразованной калибровочной кривой эти участки лучше отбрасывать. Если значения, найденные для анализируемых, образцов, лежат выше или ниже указанных пределов, их также следует отбрасывать как неточные. И вообще отбрасывание таких значений при построении калибровочных кривых в методах связывания является хорошим правилом.
3) Качество соответствия прямой линии, полученной путем logit-преобразования, часто оценивают по коэффициенту корреляции, или величине г регрессии наименьших квадратов. Следует отметить, что для набора значений, которые и на глаз дают хорошую кривую, г всегда составляет не менее 0,95. Более низкие значения г (вполне приемлемые при статистической обработке биологических данных) означают, как правило, отклонение от линейности или показывают, что по меньшей мере одна из точек явно неправильна.
4) Во многих системах logit-преобразование не позволяет получить прямую линию, в связи с чем его применение не дает преимуществ по сравнению с любым другим способом построения калибровочной кривой. Такая ситуация, часто имеющая место в случае радиоиммунологического метода анализа, связана с гетерогенностью антисыворотки, т. е. в ее основе лежит та же причина, которая не позволяет анализировать многие системы на основании простого алгебраического выражения закона действующих масс (см. гл. 1).
5) Поскольку разные участки калибровочной кривой характеризуются разной степенью точности, наилучшая линеаризация получается только при учете статистического веса каждой отдельной точки; для такого расчета требуются, однако, специальные счетно-решающие устройства.
Описан целый ряд других способов, позволяющих преобразовывать некоторые (но ие все) калибровочные кривые в линейную форму. Экинс (Ekins, 1974) предложил использовать для этой цели следующие выражения:
где В и F — доли связанного и свободного меченого лиганда соответственно, а Во и Fo — те же доли в отсутствие немеченого лиганда. С математической точки зрения эти выражения эквивалентны iogit-преобразованию и обладают поэтому теми же достоинствами и недостатками. Другие способы преобразования (например, с помощью логистической кривой или arc sin), также очень сходные с моделью logit — lg не нашли широкого применения.
Более общий подход к математическому анализу кали-бровочной кривой заключается в составлении полинома обычно третьей или четвертой степени нли же сплайн-функ-ции. Реализация этого подхода требует применения специальных счетно-решающих устройств; важное преимущество такого подхода состоит, однако, в том, что он является целиком эмпирическим и не требует никаких допущений относительно прир<^ы кривой.
В настоящее время практически все лаборатории распо-лагают каким-либо счетно-решающим устройством, пусть даже простым калькулятором, позволяющим рассчитывать средние величины и проценты. Более совершенные счетнорешающие устройства можно разделить на следующие виды: 1) большой настольный калькулятор общего назначения, такой, например, как Hewlett-Packard, Model 10; 2) обычный цифровой компьютер общего назначения любого разме-
и
7.3. Электронная аппаратура для расчета результатов
ра и 3) специализированный микропроцессор, специально предназначенный для анализа результатов, получаемых при помощи методов связывания. В свою очередь существуют три способа введения в указанные счетно-решающие устройства исходных данных (т. е. данных, поступающих непосредственно со счетчика радиоактивности): а) ручное введение данных с дисплея или отпечатанных на печатающем устройстве; б) использование перфорированной ленты, которая выдается счетчиком радиоактивности и вводится затем через считывающее устройство, и в) счетно-решающее устройство, встроенное в счетчик.
