Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Чард Т. -> "Радиоиммунологические методы" -> 63

Радиоиммунологические методы - Чард Т.

Чард Т. Радиоиммунологические методы — М.: Мир, 1981. — 248 c.
Скачать (прямая ссылка): radioimunnologicheskiemetodi1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 100 >> Следующая

Из сказанного, а также из рис. 8.1 следует исключительно важный в практическом отношении вывод, суть которого состоит в том, что чувствительность метода анализа в значи-
SO
%
\ *
I
1 ^
I
I 30 \ 20
Ж
0,016 0,004- 0,25
/fojfKejfmpauus стандарта
Рис. $.1. Определение чувствительности анализа, т. е. того минимального количества лигаида, которое позволяет отличать анализируемый образец от образца, заведомо не содержащего лиганда (нулевого стандарта). Заметим, что эта величина опреде-- ляется в значительной степени точностью анализа.
тельной мере определяется его точностью. Если метод имеет плохую воспроизводимость, то все усилия, направленные на оптимизацию методики по рассматриваемым ниже направлениям, будут лишены какого бы то ни было смысла. Отсюда следует другой вывод, редко рассматриваемый в литературе, согласно которому чувствительность метода анализа должна, вероятно, варьировать в разных определениях и зависеть от искусства оператора. Так, например, в рассмотренном выше случае чувствительность равна 10, однако если при проведении анализа воспроизводимость для данного разбавления или для нулевого стандарта (или для обеих точек одновременно) будет плохой, то чувствительность может составлять уже не 10, а 20 й даже 40.
Последний вопрос, который необходимо рассмотреть в связи с определением термина „чувствительность**, касается единиц, в которых ее следует выражать. Нет сомнений в том, что чувствительность всегда следует выражать в виде
концентрации (вес/объем) анализируемого вещества в той
биологической жидкости, для анализа которой предназначен данный метод. Однако это простое и очевидное правило часто нарушают. Одна из наиболее часто встречающихся ошибок состоит в том, что вместо концентрации указывается абсолютное количество лиганда в пробирке. Предположим, что истинная чувствительность метода анализа составляет 1 нг/мл; если объем инкубационной смеси равен 1 мл, то абсолютное количество анализируемого вещества будет рав-
но 1 нг, но если объем инкубационной смеси равен 0,1 мл, то абсолютное количество будет составлять всего лишь 0,1 нг. Непосвященный читатель может решить, что в последнем случае метод более чувствителен, тогда как в действительности чувствительность в обоих случаях остается одной и той же. Другая ошибка заключается в том, что чувствительность выражают в виде удельной величины относительно стандарта в водном буферном растворе. Допустим, что эта величина соответствует 1 нг/мл в расчете на общий объем пробы. Однако если во избежание неспецифических эффектов для анализа берут такой объем образца, который составляет лишь небольшую часть от общего объема инкубационной смеси (например, 50 мкл при общем объеме 1 мл), то эффективная чувствительность будет намного ниже (в данном случае 20 нг/мл). Из сказанного следует, что чувствительность всегда должна выражаться как концентрация вещества в анализируемой биологической жидкости.
До сих пор принято считать, что очень высокая чувствительность является отличительным признаком хорошего метода анализа, и для достижения такой чувствительности тратится немало усилий. Объясняется это тем, что при появлении радиоиммунологического метода анализа его чувствительность была намного выше, чем других доступных в то время методов, и именно поэтому он так быстро утвердился в биологии и медицине. Вместе с тем для определения многих важных соединений слишком высокая чувствительность не требуется, поскольку их содержание в биологических жидкостях на много порядков превышает чувствительность метода. По традиции принято разбавлять образцы таким образом, чтобы количество присутствующего в иих вещества не выходило за пределы калибровочной кривой. А между тем вместо разбавления образца имеет смысл подбирать такие условия проведения анализа, при которых калибровочная кривая включала бы интервал концентраций, соответствующий содержанию анализируемого вещества в реальном биологическом объекте. Такого рода практическая направленность является не менее, а в области клинической медицины даже более важной, чем стремление к максимальной чувствительности. В дальнейшем этот вопрос будет рассмотрен более детально.
8.2. Пути повышения чувствительности метода связывания
Вопрос о выборе концентрации реагентов в методах связывания кратко уже обсуждался в разд. 1.5. Рассмотрим здесь несколько более детально условия, обеспечивающие
достижение максимальной чувствительности. Описанные ниже приемы ни в коей мере не исключают друг друга, и в каждом методе анализа можно, вероятно, сочетать несколько этих приемов.
8.2.1. Уменьшение количества меченого лиганда
Уменьшение количества меченого лиганда — наиболее распространенный путь повышения чувствительности анализа и является весьма эффективным при условии, что учитываются его ограничения. К сожалению, широко распространена точка зрения, согласно которой чувствительность метода анализа находится в прямой и полной зависимости от количества используемого меченого лиганда, т. е. чувствительность можно беспредельно повышать просто путем уменьшения количества меченого лиганда. Эта точка зрения в свою очередь приводит к погоне за мечеными лигандами, обладающими высокой удельной радиоактивностью (со всеми вытекающими отсюда проблемами), причем это делается даже в тех случаях, когда вполне можно использовать меченый лиганд со значительно более низкой удельной радиоактивностью.
Предыдущая << 1 .. 57 58 59 60 61 62 < 63 > 64 65 66 67 68 69 .. 100 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed