Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре - Бухало А.С.
ISBN 5-12-000267-6
Скачать (прямая ссылка):
Чтобы избежать переноса инфекции с одного тканевого изолята на другой, вместо обычных чашек Петри диаметром 9—11 см использовали чашки для тканевых культур диаметром 4—5 см, куда помещали лип» один изолят. Если рост мицелия начинался поздно, инокулят помещали в пробирку с достаточным количеством питательной среды, что сохраняло в течение длительного времени необходимую влажность воздуха и среды.
В талевых условиях, когда из-за большого риска загрязнения и подсыхания питательной среды невозможно было проводить выделение в чашках Петри, тканевой изолят сразу помещали в небольшие пробирки на агаризованное сусло с антибиотиком.
В жаркое время года тканевой изолят на 1—2 сут помещали в холодильник при температуре 5—10 °С, а затем переносили в термостат. Это способствовал о успешному выделению в культуру видов родов Boletus, Suillus, Tricholoma и других, рост которых угнетался при температуре выше 28 °С.
Легко выделяются в культуру из тканевых изолятов плодовых тел Pleurotus ostreatus, P. dryinus, Panus tigrinus, Coprinus comat us, Armillariella mellea, Lepista mrda, Clitocybe nebularis, Macrolepiota procera, Pholiotasquar rosa, Polypoius squamo-sus, Lycoperdon perlatum, Calvatia excipuliformis, Cyathus olla, C.striatus и др.
Некоторые виды медленно образуют мицелиальную колонию при выделении из тканевого изолята и начинают расти быстрее, лило» адаптировавшись к питательной среде, после нескольких пассажей. К ним относятся Suillus luteus, S. granula-tus, Boletus eduiis, B. erythropus, Agaricus siivaticus, Xerocomus badius. Tricholoma flavovirens, Paxillus involutus, P. atramentarius, Amanita rubescens, Ajnuscaria, Langermannia gigantea и др.
В ряде случаев не наблюдалось даже обрастания тканевого инокулята гифами воздушного мицелия, хотя загрязнения посторонней микрофлорой не отмечалось. Наиболее показательным примером может служить ценный съедобный гриб Cantharellus cibarius, обычно обильно плодоносящий в естественных условиях. Мы собирали его на протяжении многих лет в различных ботанико-географических районах Украины и других регионах СССР, но так и не смогли выделить в культуру. Не были выделены в культуру, несмотря на наши неоднократные попытки, также Lactarius torminosus, L. deiiciosus, L. rufus, L. necator, Russula delica, R.vesca, R.virescens и некоторые другие виды, хотя выделение их проводили на питательной среде с витаминами, растительными стимуляторами, использовали влажную камеру и охлаждение.
Метод выделения мицелиальных культурji3 базидиоспор использовался для получения чистых культур копротрофов, лигнотрофов, подстилочных сапротро-фов и грибов некоторых других экологических групп, для которых характерно быстрое прорастание базидиоспор.
Для проращивания мы использовали, как правило, свежий споровый материал и лишь в отдельных случаях выделение проводили из спор, хранившихся при температуре 5—10 °С от нескольких суток до нескольких месяцев. Для проращивания базидиоспор из свежих плодовых тел использовали метод, предложенный Н.Фризом (Fries, 1950). Шляпка плодового тела гриба, собранного в день выделения или 1—2 сут хранившегося в холодильнике, отрезалась от ножки и с помощью Вазелина прикреплялась под крышку пустой стерильной чашки Петри. Агаровая среда разливалась в другие чашки, крышки которых поочередно на 5 мин заменялись крышкой с плодовым телом. За это время в чашку успевают попасть от нескольких сотен до нескольких тысяч базидиоспор. Если плодовые тела малы, то их шляпки прикреплялись не в центре крышки, а по периферии и крышку вращали вокруг оси так, чтобы споры из шляпки попадали на разные участки поверхности среды. Этот же метод оказался очень удобным при выделении в культуру выс-
ших базидиомицетов в полевых условиях. Кусочек шляпки или если это маленькое плодовое тело, то целая шляпка, предварительно протертые этиловым спиртом, иглой, булавкой или энтомологической иглой, прикалывали к пробке пробирки так, чтобы споры’с гименофора падали на скошенную поверхность агаризо-ванной среды. Через несколько часов булавку со шляпкой стерильно удаляли, пробирку закрывали этой же пробкой и хранили при комнатной температуре. Споры обычно вскоре прорастали и через 2—4 недели образовывалась хорошо развитая дикариотическая мицелиальная колония. Этот метод оправдал себя во время продолжительных экспедиций при выделении видов родов Agaricus, Colly-bia, Marasmius, Flammulina, Oudemansielia и др.
Для проращивания базидиоспор споровую суспензию сеяли на агаризованную питательную среду поверхностно или глубинно. Концентрацию спор, оптимальную для прорастания, определяли в каждом конкретном случае, так как она не была постоянной для отдельных видов и даже плодовых тел. Процент прорастания спор, как правило, невелик и у некоторых видов не превышает 0,001. Прорастание базидиоспор наблюдали под микроскопом, проросшие базидиоспоры переносили в чашки Петри или пробирки с питательной средой. Для выделения культур из базидиоспор обычно использовали сусло-агар (4° по Баллингу) и картофельно-глю-козный агар. На этих средах без внесения каких-либо дополнительных стимуляторов прорастали споры Flammulina velutipes, Panus tigrinus, Oudemansielia brun-neomarginata, видов родов Pleurotus, Coprinus, Pholiota, Agaricus. Если проращивание базидиоспор проводилось из плодовых тел, произрастающих в природе, то в среду добавляли антибиотики. Для сохранения высокой влажности в чашках Петри их заклеивали лейкопластырем.
