Молекулярная биология. Структура и функция белков - Степанов В.М.
ISBN 5-06-002573-Х
Скачать (прямая ссылка):
193
7-56
терное жвЛтое окрашивание и может быть количественно определена спектрофотометрически: v‘ ’’
Реактив Эллмана
v.*, vhi Л Л*
+ H-S-Cys—Белок
i
' rj.*:
•. r..: , , • i. • *
Ш=СНХ ..
^^C-S—S-Hlys-^EeflOK . ,
/ Смешанный дисульфид
СООН
Q1/ ’ "i" /
^CH=Cft^
Дианион 5-тмерхапто-^:нитроб^190йной
| кислоты; интенсивно окрашен
C00\
Образованнё меркаотядов металлов. Сульфгидрильная группа, будучи ионизована» , т.е. в форме меркаптид-иона, специфически взаимодействует с катионами многих тяжелых металлов и металлорганиче-скими соединениями, образуя весьма прочные меркаптиды. Аналитическое значение имеют реакции с катионом двухвалентной ртути
• • /'W -¦*. . *
—CH2~S" + Hg2* -¦ -CH2-S-tig", а такжё р-tudpoxcit- (или р-хлор-)меркур бензоатом
„ о ц - ¦ • >¦ ' fl
'—CH2-^S- + ¦Hg-“C6Hr€0a- ^-^-flg-CACOQ-'
*•' ' р-Ыеркурбейэоат
' ; (сHg* может' •’ * "
быть связан С1" или ОН")
Связь Hg-S в таких соединениях занимает промежуточное положение между ионной и ковалентной н, как правило, достаточно прочна. 194
Образование меркаптида р-меркур бензойной кислоты сопровождается характерным изменением УФ-спектра, что может быть использовано для количественного определения свободных сульфгндрильных групп в белках и пептидах, хотя этот способ менее удобен, чем реакция Эллмана. , *"1
9-2.6. Модификация шшдаэольной группы гистидина
Алкшшрованве. Имидазолч гистидина легко вступает в реакции алкилирования, например с иодуксусной -кислотой или ее амидом в нейтральной или слабощелочной среде, Ъричем в зависимости от микроокружения этой группы в белке или способа связывания алкилирующего реагента реакция может происходить По одному или по другому атому азота (по N-1 или N-3):
у v Г - 1 •
' (О
-С--------N—СН2“С00‘
' II II
-с--------N (1) ш СВ ^СН
II II ' Si** .
(4) СВ ^СН (2) + 1-СН2С00 \N.
I
H
(3) '\-C------N- ,
II I
CH CB, 6
j i N v“'i
I(3)
, >• i¦ ' CH2—CQQ:
.y- 1 • ¦. 1 ’ ж . - ¦ * * * г ** • v
N-1 (а) и N-3 (б)'- карбоксиметилгистидин
Ч *' ^ i |
Следует учитывать, что двойная связь в системе N==C—N имидазо-ла гистидина способна перемещаться и занимать любое из двух положений. Редоция^алкилирования не является характерной только для гистидина, она может протекать также с остатками метионина, лизина и даже с некоторыми карбоксильными группами, что зависит от pH и в значительно большей мере от особенностей микроокружения модифицируемого остатка.
Азосочетание. Реакция азосочетания может затрагивать в имида-зольной группе гистидина как атом С-2, так и атом С-4.
» . • \ Н
195
+ ^2"ЮбНч“so2nh2
C-^f-CA-SOaNSa
\\
т^02-с^ц-№=^
I
в
I
и
Два продукта азосочетания: по атоыу С-2 и атому С—4
Продукты ааосочетания гистидина с различными солями диазония (на схеме показана реакция с амидом диазосульфаниЛовой кислоты) имеют интенсивную, обычно красцо-оранжевую окраску (реакция Плули).
Для избирательной деструкции остатков гистидина прибегают к фоФоокислению кислородом в присутствии сенсибилизирующих красителей.
9.2.7. Модификация гуышдогруппы аргшшяа
Эта задача является особенно трудной, поскольку 6-гуанидогруппа аргинина является очень сильным основанием (рКа * 14) и может быть депротонирована, что позволило бы ей выступать в качестве нуклеофила лишь в крайне жестких условиях, при такой концентрации щелочи, которая обрекает белок на глубокую денатурацию. Удается, однако, Использовать дйя избирательной модификации аргинина способность гуанидогруппы вступать в реакции образования гетероциклов, с некоторыми дикетонамн или альдегндокетонами:
