Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Степанов В.М. -> "Молекулярная биология. Структура и функция белков" -> 12

Молекулярная биология. Структура и функция белков - Степанов В.М.

Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функция белков — М.: Высшая школа, 1996. — 335 c.
ISBN 5-06-002573-Х
Скачать (прямая ссылка): strukturifunkciibelkov1996.djvu
Предыдущая << 1 .. 6 7 8 9 10 11 < 12 > 13 14 15 16 17 18 .. 140 >> Следующая

» >} X
ная группа которого активирована. Это обусловлено тем, что активирующие группы вызывают смещение электронной плотности не только от углерода карбонильной группы (что необходимо для облегчения &г*ки этого атомаЬуйлеофильной аминогруппой аминокомпонбнта), но и от Са^атома:' Последнее благоприятствует отщеплению атома водоро-
; « ч J * . .nr .
*4. 4 * . . . • *• * . .
да, находящегося при этом углероде, в виде протока. Такое отщепление переводит остающиеся три заместителя у о-атома углерода в плоскую тригональную конфигурацию. При. возврате протона, который может подойти к Са-атому с обеих сторон плоскости, происходит образование равной смеси L- и D-изомеров, т.е. рацемизация. Таким образом, активация карбоксильной группы несет в себе потенциальную опасности рацемизации С-концевых остатков аминокислот в пептидных фрагментах:
СЙз СН3
I _ -и* I J.
R-CO-NH-C—C00-C’6F5 ?==* R-00-fffl-C—C00C6F5
I. +н -
н
Отщепление и присоеди- Карбанион, образуемый
нение протона у С^-атома благодаря активации
приводит к рацемизации карбоксильной группы
Амидные связи уретанового тина в бензилоксикарбонил- и ВОС-аминокислотах менее благоприятствуют рацемизации по сравнению с обычными пептидными связями. Следовательно, планируя синтез пептида, выгодно, не конденсировать его фрагменты, поскольку для этого пришлось бы активировать карбоксильные;, группы .Ьейтидов, а присоединять к растущему пептиду^ защищенные активированные аминокислоты одну за другЬйначиная С С-ко#цевого аминокислотного остатка/ Синтез длинных пептидов иногда приходится все же прово-дить из фрагментов, которые затем соединяют друг с другом. В этом случае стараются выбирать фрагменты так’ чтобы в С-концевом положении каждого из них оказывался остаток глицина, который не содержит асимметрического атома и, Значит, не может рацемизоваться, или остаток пролина, в котором нет атоМа водорода при сг-углеродном атоме и не может происходить |>ацеми?^ция; по описанному выше механизму. Бели такой прием почему-либо невозможен, прибегают к конденсации фрагментов, используя азиды пептидов, — метод, nph котором опасность рацемизации минимальна, хотя и не исключена вовсе.
Исключительно ценным развитием ступенчатого синтеза пептидов явился твердофазный метод синтеза пептидов, предложенный Р.Меррифилдом. C-Концевую аминокислоту присоединяют к полимерной матрице сложноэфирной связью, исцользуя, например, реакцию .соли аминокислоты с активными бромметильными группами на поверхности поперечно сшитого полистирола: •
СНз
F*oc-NH-CH-C00- + Вг-СН2-СеН 4 ... к матрице
1
СНз
I
Fao с-^Ш-СН-СО-0СН2~СбН^-• • к матрице
После образования сложноэфирной связи между С-концевым остатком и матрицей отщепляют защитную группу (обычно ВОС или Fmoc), обрабатывая полимер соответственно кислотой или амином:
¦ • 1 "
I Обработка пиперидином
СНз
I
Ш2-СН-С0-0СН2-СбН4“..к матрице
32
К освободившейся о^-аминогруппе присоединяют аминокислоту предшествующую С-концевой, используя для этого ангидрид защищенной аминокислоты или иной способ активации — реакцию в присутствии карбодиимида, пентафторфенйлового эфира защищенной аминокислоты и т.п.:
с6н5.
I
СН2 СНз
I
Fmoc-NH~CH“€00CeF5 + NH2—CH-CO-0CH2—СбН4—... к матрице
1
С6Н5
I
СН2 СНз
I 1
Finoc—NH—C№*<J0—NH—СН-СО—0СН2“СбН4—• - -к Матрице Затем снова отщепляют защитную группу
| Обработка пиперидином
С6Н5
СНг СНз
I I
IM2-CH-C0-flH-CH-C0-flCH2-C6lli-...K матрице Фенилаланил-аланин
3 * /
и повторяют цикл, присоединяя следующий аминокислотный остаток, и т.д.
Такие циклы можно повторять много раз, получая весьма длинные пептидные цепи, содержащие до 100 остатков и более. Многостадийный синтез на твердофазном носителе выгоден прежде всего тем, что он, позволяет избежать потерь синтезируемого пептида, неминуемых при выделении продукта синтеза в обычных условиях. Выход на стадии присоединения аминокислоты и отщепления защитной группы достигает, как правило, 99 — 99,5%, в частности за счет применения большого избытка ацилирующего компонента. Важно и то, что растущие пептидные цепи, будучи связаны с носителем, защищены от
Предыдущая << 1 .. 6 7 8 9 10 11 < 12 > 13 14 15 16 17 18 .. 140 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed