Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
тела Flammulina velutipes могут быть получены лишь при слабой
освещенности. Без света образуются зачатки плодовых тел у Auricularia
auricula, Pholiota adiposa, Flammulina velutipes, Agaricus bitorquis и
некоторых др. Свет необходим для образования зачатков и развития плодовых
тел Ganoderma lucidum, Lentinus edodes, Armillariella mellea, Volvariella
bombycina (Pers. ex Fr.) Sing., Pleurotus sapidus Kalcher, Tremella
fuciformis Berk, и др. Увеличение экспозиции и интенсивности света
приводит обычно к более раннему и обильному образованию плодовых тел, их
нормальному формированию и пигментации.
Аэрация и влажность оказывают влияние на образование и формирование
плодовых тел. Снабжение культур свежим воздухом с относительной
влажностью 80-90% благопрятно сказывается на развитии плодовых тел. При
высоком содержании в среде углекислого газа появляются абортивные
плодовые тела, задерживается развитие шляпки, изменяются ее размеры и
происходят морфологические изменения. Если воздух не обновляется, то
могут образовываться лишь зачатки плодовых тел. Образование ненормально
развитых шляпок, появление новообразований может быть обусловлено
действием паров минеральных масел, каменноугольного дегтя и др. При
низкой транспирации число плодоношений уменьшается, рост шляпки
подавляется, особенно у грибов семейства Polyporaceae.
458
Полученные в культуре плодовые тела должны быть идентифицированы по
морфологическим признакам, характерным для плодовых тел, произрастающих в
природных условиях.
XIX.3.2. КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ВЫСШИХ
БАЗИДИАЛЬНЫХ ГРИБОВ НА ЖИДКИХ СРЕДАХ
XIX.3.2.1. МЕТОД ПОВЕРХНОСТНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
Мицелий можно выращивать на жидких средах поверхностно, т. е. в
стационарной культуре (в этом случае гриб образует в поверхностном слое
жидкости более или менее плотную мицелиальную пленку), и погруженно, т.
е. в жидкости. К недостаткам поверхностного культивирования относятся
неблагоприятные и неодинаковые условия развития мицелия: воздушный
мицелий плохо снабжается питательными веществами и хорошо обеспечен
кислородом, а субстратный мицелий, напротив, развивается в анаэробных
условиях, но при этом тесно контактирует с питательной средой. Обычно
мицелий растет при поверхностном культивировании гораздо медленнее, чем
при погруженном, однако бывают исключения из этого правила. Условия
погруженного культивирования более благоприятны для роста мицелия, но
повышенная аэрация может подавлять, например, активность некоторых
ферментов [281, 283].
Гриб, образующий на поверхности жидкости мицелиальную пленку, может
развиваться нормально при непрерывном обновлении питательной среды и
удалении токсических продуктов обмена веществ т. е. в проточной среде.
Метод поверхностного культивирования, предложенный В. Я. Частухиным и М.
А. Николаевской [466], заключается в следующем. Культуру гриба выращивают
в плоскодонной колбе (рис. 132, 3), ко дну которой припаяна сливная
трубка с двумя отводами. На концы стеклянных трубок надевают резиновые
трубки с зажимами. Колба с дистиллированной водой (4), колбы с
питательной средой (2), колба с водой (/) для промывки колбы 2 соединены
между собой и с колбой 3 с помощью стеклянных колпачков и резиновых
трубок с зажимами. При такой системе выращивания можно многократно менять
питательную среду, промывать мицелиальные пленки для удаления продуктов
метаболизма и вносить дополнительную культуру какого-нибудь
микроорганизма. Этим методом удалось проследить полный цикл развития
Lepiota procera, Coprinus raditus, Clitocyde nebularis, Armillariella
mellea и других грибов.
ших базидиальных грибов методом Частухина:
1 - колба с водой для промывания колбы 2; 2 - колба с питательной средой;
3 - колба для выращивания грибов; 4 - колба с дистиллированной водой.
459
XIX.3.2.2. МЕТОД ПОГРУЖЕННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
Метод погруженного культивирования обладает рядом преимуществ по
сравнению с поверхностным. Механическое перемешивание и непрерывная
аэрация способствуют доступу питательных веществ и кислорода ко всем
клеткам мицелия, обеспечивая одинаково благоприятные условия для роста и
накопления продуктов метаболизма. Погруженное выращивание требует строго
определенных условий, соответствующих физиологическим потребностям гриба,
и соблюдения стерильности на всех этапах (см. раздел II 1.4). Одним из
существенных условий успешного выращивания грибницы является правильная
подготовка посевного материала (инокулюма). До посева на жидкую среду
мицелий сохраняют на твердых питательных средах различного состава в
зависимости от биологических особенностей штамма: сусловом агаре,
опилках, соломе и т. д., обычно в хлолодильнике. Вегетативный мицелий
съедобных грибов, как правило, не дает спороношений или споро-носит
слабо, что диктует необходимость засева ферментационной среды механически
измельченным мицелием. Известно [568], что измельченный в смесителе
мицелий, отдельные участки гиф которого состоят из нескольких клеток, в
