Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
температура хранения 4-5° С [754], допускается хранение при 15-18° С.
Большинство культур пересевается 1-3 раза в год. Обычно для грибов,
обильно спороносящих или образующих хламидоспоры и скле-роции, интервал
между пересевами больше. Однако при этом нередко существенно изменяются
морфолого-физиологические признаки грибов, а иногда наблюдается потеря
отдельных свойств. Дегенерация культур выражается в изменении размеров и
формы конидиеносцев и спорангиеносцев^ в полной утрате спорообразования
или резком сокращении количества спор, в изменение размеров клеток
мицелия и перерождении их содержимого, утрате полового спороношения и
способности образовывать склероции и пр. Часто изменяется вид всей
колонии гриба - образуются слизистые, складчатые и другие не свойственные
Виду формы. Потеря признаков и свойств возрастает как с увеличением числа
пересевов, так и при пересевах с большими промежутками. Правда, некоторые
виды и роды хранятся этим способом без изменения очень длительное время.
В крупнейших коллекциях мира часто прибегают к такому способу хранения
культур грибов. Однако возможность изменения морфолого-физиологических и
других свойств организмов, повышение вероятности инфицирования культур
при частых пересевах привели к поискам других методов длительного
хранения культур.
ХХ.2.1.2. ХРАНЕНИЕ ПОД ВАЗЕЛИНОВЫМ МАСЛОМ
Широко распространенный метод. Он значительно увеличивает период
выживаемости грибов на косяках агара (до 3 лет и более), не требует
дорогостоящего оборудования, скор и прост, предохраняет культуры от
клещей. Основной недостаток метода - разбрызгивание масла со спорами при
обжигании иглы во время пересевов, вследствие чего инфекция может
распространиться в лаборатории. Этого можно избежать, медленно прогревая
иглу или опуская ее предварительно в сосуд с водой.
Масло уменьшает доступ кислорода к культуре и предотвращает высыхание,
однако полностью не изолирует культуру от воздуха, поэтому последняя
продолжает слабо развиваться и расти. Масло должно быть высоко очищенным
с удельным весом 0,8-0,9 г/см3. Лучшим является медицинское вазелиновое
масло. Перед заливом масло стерилизуют в автоклаве или сушильном шкафу
при 150-170° С в течение 1-2 ч. Культуры выращивают на природной среде,
как правило агаризованной, застывшей в виде короткого косяка, обычно 2-
недельного возраста. Слой масла в пробирке не должен превышать 1 см.
Более тонкий слой не предохраняет культуру от высыхания, а под толстым
слоем культуры могут погибнуть от недостатка того минимума кислорода,
который необходим для сохранения жизни культуры. Культуры из-под масла
необходимо пересевать на свежие среды первый раз через год после
погружения под масло, а затем каждые 2-3 года. Если через год культуры
утратили жизнеспособность, то их восстанавливают из коллекции,
поддерживаемой периодическими пересевами, вновь погружают под масло и
пересевают в более короткие сроки
464
Рис. 133. Прибор для заливки культур дрожжей вазелиновым маслом [527]:
1 - делительная воронка, наполненная вазелиновым маслом; 2 - резиновая
трубка; 3 - нижний конец делительной воронки; 4 - обычная химическая
воронка.
[35]. Сконструирован специальный прибор для разлива масла [527], который
стерилизуется в автоклаве. Прибор укрепляют на штативе, в делительную
воронку наливают стерильное масло, которое эатем разливают по пробиркам.
Кончик делительной воронки, оттянутый в тонкую трубку, пропущен через
стеклянную воронку, перевернутую раструбом вниз (рис. 133). Обе воронки
скреплены резиновой трубкой. Во избежание загрязнения культур для заливки
маслом каждой культуры используют отдельные флаконы [559].
При этом загрязнение культур обнаруживалось в 0,6% пробирок [35].
Культуры, залитые маслом, могут храниться без пересевов 3-6 и более лет
[527, 677]. Большинство культур грибов под маслом целесообразно хранить
при 4° С. Хорошая выживаемость под вазелиновым маслом свойственна многим
видам грибов [240, 241]. В частности, спорообразующие культуры обладают
хорошей устойчивостью при хранении под маслом и после пересева многие из
них сохраняют морфологические и физиолого-биохимиче-ские свойства [527].
Хорошая выжимаемость под маслом отмечена у базидиомицетов, дискомицетов,
некоторых патогенных для человека штаммов. Особенно важен этот метод для
хранения неспороносных форм грибов, которые плохо поддаются лиофилизации
[210*, 430].
ХХ.2.2. ХРАНЕНИЕ НА ЕСТЕСТВЕННЫХ СУБСТРАТАХ
Методы хранения культур на естественных субстратах давно нашли, широкое
применение и некоторые из них используются наряду с лио-филизацией в
промышленных лабораториях и коллекциях для хранения споровых форм - это
хранение на зерне, в почве, песке.
ХХ.2.2.1. ХРАНЕНИЕ НА ПШЕНЕ (ЗЕРНЕ)
В пробирки или флаконы вносят соответственно по 5-10 и 10-15 г чистого
сухого пшена. Закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при
давлении 1,5-2 атм в течение 0,5 ч. Сухое пшено* стерилизуют дважды с
