Методы экспериментальной микологии - Билай В.И.
Скачать (прямая ссылка):
времени.
Более подробные сведения о дозе облучения, единицах ее измерения, физико-
химических основах радиобиологии, биологическом действии излучений можно
получить в специальных руководствах [120, 229, 483, 486 и др.].
Дозиметрия ионизирующих излучений осуществляется лицами со специальной
подготовкой. Для работы в реакторах (нейтронное излучение), с
радиоактивным полонием (a-излучение), электромагнитными излучениями (у- и
рентгеновские излучения) необходимо знакомство с режимом работы
соответствующих установок и строжайшее выполнение норм и требований
службы защиты.
XVI.3.2.2. ОСНОВНЫЕ МЕТОДЫ ОБЛУЧЕНИЯ ГРИБНЫХ СПОР
Общепринятым методом облучения грибных спор для получения доз-ной кривой
выживаемости является облучение стандартизованной взвеси спор в воде. Как
правило, наиболее удобна для облучения взвесь 1 • 106 спор/мл [161, 230],
однако часто используют более концентрированные суспензии [495, 570].
Особенно это относится к бактериальным культурам. Что касается грибов с
более крупными спорами, то для них вполне приемлема концентрация 1 • 106
спор/мл, а для видов родов Alternaria, Stemphylium, Helminthosporium и
других, образующих крупные многоклеточные конидии,- 5 • 10б конидий/мл
[158].
Для облучения готовят водную стандартизованную суспензию спор грибов
(например, 1 • 106 клеток/мл) так, как описано в разделе XVL2.3.5. Для
этого используют культуры исследуемых штаммов грибов в известной фазе
роста, выращенные на поверхности суслового агара. Обычно облучение
проводят, когда гриб находится в начале стационарной фазы роста, но в
ряде случаев, в зависимости от задач эксперимента, облучение ведут на
разных этапах экспоненциальной фазы роста. По 4 мл приготовленной
суспензии разливают в биологические пробирки диаметром 18 мм и каждую из
них одновременно облучают определенной дозой у-лучей. Обычно применяют
несколько (8-14) последовательно увеличивающихся доз облучения.
Облученные суспензии спор (по возможности немедленно) высевают в чашки
Петри в соответствующих разведениях или, в зависимости от дозы у-
облучения, без разведения. Степень разведения для каждой культуры
подбирают эмпирически. Для достоверности учета количества выживших спор
рекомендуется выращивать в чашке Петри не более 100 колоний.
Следовательно, при облучении взвеси 1 • 106 конидий/мл необходимо
высевать четвертое разведение [211]. Затем чашки Петри заливают
расплавленным и охлажденным до 30-40° С сусловым агаром. Каждый
облученный образец высевают не менее чем на 3-5 чашках Петри. Посевы
термоста-тируют при 25 ± 2° С в течение 7-14 сут и учитывают количество
выросших макроколоний. Если для посева использовали разведения суспензии,
необходимо произвести пересчет количества выросших макроколоний на
соответствующее разведение.
384
Стандартизованную взвесь спор можно облучать и в жидкой питательной среде
[255]. Облучение спорового материала Р- и а- лучами, проникающая
способность которых невелика, осуществляют только в сухом состоянии на
соответствующей подложке, что позволяет исключить влияние на облучаемые
тесты продуктов радиолиза воды [159, 672]. Подробно модификация этого
метода описана в разделе XVI.2.3.5. В некоторых случаях (например, для
более детального изучения радиоустойчивости) применяют метод непрерывного
облучения растущей культуры [161].
Кроме чистых культур грибов в лабораторных условиях облучают естественные
субстраты, главным образом зерно, овощи, фрукты с находящимися в них
микроорганизмами. Знание пределов устойчивости таких микроорганизмов, в
том числе грибов, необходимо для рекомендаций по стерилизации и
увеличению сроков хранения продуктов питания.
Сведения об облучении ионизирующей радиацией почвы весьма
немногочисленны. Наиболее распространен метод облучения образцов
различных типов почв разными дозами у-лучей с последующим выделением из
них культур грибов [205, 636, 744, 769, 781]. В результате получают
данные о степени радиоустойчивости разных групп микроорганизмов. Кроме
того, у-облучение используют в качестве селективного фактора для
подавления быстрорастущих грибов и выявления новых, редко встречающихся
или специфических видов [636]. Предложена модификация этого метода,
позволяющая подавлять развитие быстро- и широкорастущих представителей
порядка Mucorales и семейства Mucedinaceae, стимулировать развитие видов
родов Aspergillus и Fusarium, не изменяя видового состава темноцветных
гифомицетов. Для этого почвенную суспензию в разведении 1 : 10 разливают
в пробирки (по 5-8 мл) и облучают при постоянной интенсивности дозой у-
лучей 100 крад. Посев облученных почвенных суспензий производят методом
разведений [211], применяя разведение на 1-2 порядка меньше, чем при
посеве необлученных почвенных образцов.
XVI.4. ПОНЯТИЕ РАДИОЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ, КРИТЕРИИ
Дозы, вызывающие гибель разных организмов, значительно различаются.
Каждый организм характеризуется уровнем чувствительности к действию
