Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Хранят растворы при 4—6° в течение месяца.
Раствор Хэнкса (Hanks, Wallace, 1949). Сбалансированный раствор широко используют при приготовлении питательных сред.
NaCl .......... 8,0 г
Kci............
CaClj ...........
MgCIs ........... 0,1 »
MgSOi • 7H20 .......1 0,1 »
Na2HP04 ......... 0,06 »
KH2P04 ......... 0,06 >¦
NaHCOs ......... 0,07 »
Глюкоза ......... 1,00 »
Фенол (водорастворимая
форма) ........ 0,02 >,
(воды бидистиллированной, пере-
гианной в стекле до 1 л)
Хлористый кальций (СаС12) предварительно растворяют в 30— 50 мл воды и медленно добавляют к раствору остальных солей. При наличии этой соли с большим содержанием кристаллизационной воды (NaaHPCU ¦ 12НгО) ее добавляют в количестве 2 г. Полученный раствор фильтруют через бумажный или ватно-марлевый фильтр. Затем раствор разливают в стеклянную посуду, закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют текучим паром при температуре 100° без давления по 20 минут 3 дня подряд.
Раствор при добавлении индикатора фенолового красного имеет красно-оранжевый цвет. Для установки pH в раствор Хэнкса добавляют стерильный 1,4«/о раствор двууглекислого натрия (NaHC03).
Раствор Хэнкса при работе с культурой тканей должен иметь pH 7,2—7,4.
Хранят раствор при 4—6°, но можно также и при комнатной температуре.
Срок годности один месяц.
¦При приготовлении питательных сред часто используют раствор Хэнкса 10-кратной концентрации.
Раствор Эрла (Earle, Shilling, Stark, Straus, Bown, Shelton, 1943). Обладает большей буферной емкостью, чем раствор Хэнкса. Широко применяется в качестве основы при приготовлении различных питательных сред.
NaCl ..............6,8 г
КС! . ............0>4 »
СаСЬ ...................0,2 »
MgSOi ..................0,1 | »
N aHjPO* ...............0,125 »
NaHCOa .................2,2 »
Глюкоза ................1,0 »
(на 1 л дистиллированной воды)
Все концентрации рассчитаны на безводные соли. СаСЬ растворяют отдельно, затем добавляют к остальному раствору и хорошо перемешивают. В этот момент pH раствора должен быть
7.4. Раствор стерилизуют фильтрацией. После фильтрации pH раствора доводят до 7,5.
Раствор фенолового красного. Для удобства определения концентрации водородных ионов растворов и питательных сред, используемых при культивировании тканей, к ним добавляют в качестве индикатора феноловый красный. Для этого готовят 1*/о раствор фенолового красного (водорастворимая или спиртораст-воримая форма) и прибавляют к растворам и средам из расчета получения конечной концентрации фенолового красного, равной 0,002%.
В этой концентрации феноловый красный не оказывает какого-либо нежелательного действия на культивируемые клетки и вирусы.
При pH 7,2—7,4 цвет растворов и сред, содержащих феноловый красный, оранжево-красный. При сдвигах pH в щелочную сторону среды и растворы принимают соответственно красномалиновую окраску, а при сдвигах в кислую сторону — желтую.
Растворы соды и уксусной кислоты. Для установки pH солевых растворов и питательных сред рекомендуется использовать
1.4, 7,5 и 8% растворы двууглекислого натрия, а также 3% раствор уксусной кислоты.
Растворы соды различной концентрации готовят на бидистил-лированной воде и стерилизуют фильтрованием.
Хранят растворы в посуде с резиновой пробкой при 4—6е в те* чение месяца.
3% раствор уксусной кислоты готовят из ледяной уксусной кислоты на стерильной бидистиллироваиной воде в стерильной посуде. Раствор уксусной кислоты добавляют к среде или раствору при сдвиге pH в щелочную сторону.
Хранят раствор при 4—6° или при комнатной температуре в посуде с резиновой пробкой.
Раствор трипсина. Благодаря применению трипсина (Делбек-ко, Фогт, 1954) методика приготовления растущих культур тканей существенно изменялась. При воздействии раствора трипсина на кусочки тканей при определенных температурных условиях межклеточное вещество растворяется и ткань мацерируется на отдельные или небольшие группы клеток. Таким образом, появилась возможность готовить культуры из суспензий с определенным числом клеток, а также получать однослойные культуры клеток ка стекле.
Следует отметить, что трипсины не всех производств в равной степени обладают необходимыми для приготовления культур свойствами.
Так, в Московском научно-исследовательском институте вирусных препаратов Н. В, Холчевым и др. (1959) были испытаны препараты трипсина различного происхождения. Этими исследованиями было установлено, что препараты трипсина Дифко
1 :250 обладали максимальной активностью; меньшую активность имел кристаллический трипсин, изготовленный в Чехословакии, и наименее активным оказался трипсин фирмы Мерк. Для приготовления культур обычно пользуются 0,25% раствором трипсина на фосфатном буферном растворе.
