Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Разработанная в Московском научно-исследовательском институте вирусных препаратов установка для стерилизации воздух* (рис. 1) представляет собой систему, состоящую из фильтро1 предварительной грубой очистки воздуха системы Рекк /, венти лятора системы Сирокко 2, охладителя воздуха 3 или без него
стерилизующего фильтра 4 и воздуховодов 5. Фильтры предварительной очистки воздуха монтируются на всасывающей линии вентилятора. Забор воздуха производится обычно из коридора или предбоксника. Воздух из вентилятора поступает по воздуховоду (200 X 200 мм) в охладитель, представляющий собой герметический кожух, в котором заключены испарители, охлаждаемые холодильным фреоновым агрегатом. Далее по воздуховодам, воздух поступает к стерилизующему фильтру, который является ко-
Рис. 1. Схема установки для стерилизации воздуха в боксах.
1 фильтр грубой очистки; 2- вентилятор; 3 охладитель; 4—стерилизующий фильтр; 5 воздуховода; б--заслонка.
печным элементом системы. Фильтр снаряжается фильтрующим материалом ФПП-15-3. Перед фильтром в воздуховоде установлен шибер для регулирования количества подаваемого воздуха. Производительность одного фильтра при различной нагрузке равняется 600—1200 м3/час.
Фильтры этой конструкции даже при максимальной нагрузке (1200 м3/час) обеспечивают надежную стерилизацию воздуха не менее 6 месяцев.
Один фильтр в помещении в 60—80 м3 обеспечивает 10—15-кратную смену воздуха в час.
Фильтры обычно монтируют в перегородке между предбоксни-ком и боксом. При работе системы в боксе или операционной комнате создается избыточное давление, и воздух из них все время вытесняется в предбоксник. Это в свою очередь также создает дополнительные условия, препятствующие поступлению извне загрязненного воздуха.
ТРЕБОВАНИЯ К ПОСУДЕ И МЕТОДЫ ЕЕ ОБРАБОТКИ
Из других факторов, влияющих на успех культивирования тканей, определенное значение имеет качество используемой стеклянной посуды.
Для культивирования тканей в небольших объемах применяются пробирки обычной формы и пробирки с уплощенной в
Рис. 2. Чашки Карелля и пробирка с уплощенной стенкой.
нижней трети стенкой. Последние очень удобны при культивировании тканей для морфологических исследований. Очень удобны чашки Карреля различных размеров (рис, 2). Для культивирова-
Рис. 3. Матрасы разных размеров для культивирования клеток.
ния больших количеств тканей используются различных размеров матрасы Ру, Повитской (рис. 3). Естественно, культивирование можно проводить и в посудах другой формы, если они отвечают поставленной задаче.
Для культивирования желательно иметь посуду из нейтрального или из стекла «Пирекс», так как обычное стекло в процессе
частой обработки местами выщелачивается, что влечет за собой изменение pH питательной среды и появление химических соединений, вредно действующих на рост клеток. Но и обычное стекло, выпускаемое нашими заводами, в частности заводом «Дружная горка», является по своему качеству достаточно хорошим, не содержащим примесей, которые оказывают вредное действие на культивируемые клетки. Посуда из этого стекла может быть с успехом использована для культивирования клеток.
Обязательным требованием к посуде для выращивания клеток является хорошая ее обработка, так как методика культивирования клеток непосредственно на стекле требует абсолютно чистой поверхности. Имеется много способов обработки посуды. В каждой лаборатории используется метод наиболее экономичный,, удобный и дающий наилучшие результаты.
Мы приведем несколько наиболее распространенных способов, применяемых для обработки посуды. Так, Эрл и др. (Earle et al., 1954) рекомендовали мыть посуду горячей смесью азотной (20%) и серной (80%) кислот и затем тщательно промывать дистиллированной водой. Ледикко и др. (LedinKo et al., 1952) употребляли для обработки посуды раствор патентованного детергента 7Хв воде в разведении 1 : 10. В этом растворе посуду оставляют на ночь, потом тщательно промывают этим же детергентом, а затем горячей водой и в заключение трижды ополаскивают дистиллированной водой.
Жачек (1956) предложил кипятить посуду в мыльной стружке, после чего обрабатывать ее 25% серной кислотой и, наконец, споласкивать тщательно дистиллированной водой.
Пол, Мельник рекомендуют обрабатывать посуду мыльным раствором. Для этого готовят 15®/« мыльный раствор путем кипячения кусочков мыла в воде. После остывания образуется гель, который разводят теплой водой .цо получения 0,5% раствора. Посуду моют ершом, затем помещают в 0,5% мыльный раствор и кипятят в течение 15 минут. Горячую посуду вынимают и прополаскивают 15 раз в горячей воде и 5 раз в дистиллированной воде.
Новую посуду сначала помещают на 1 час в 25% раствор серной кислоты, потом промывают 10 раз в проточной воде, кипятят в 0,5% растворе мыла и обрабатывают, как описано выше.
Может быть рекомендован старый метод обработки посуды, применяющийся в гистологических лабораториях. Всю новую посуду моют теплой водой с мылом, споласкивают водой и погружают на 3 часа в хромпик (100 г двухромовокислого калия на
