Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
1 л концентрированной серной кислоты). Затем в течение 9 часов промывают в проточной воде и споласкивают дистиллированной водой.
Старую, бывшую в употреблении посуду обрабатывают хромпиком лишь периодически и не более чем в течение 1 часа.
В. И. Жевандрова (1956) рекомендует новую стеклянную посуду погружать на 1 час в 25% раствор серной кислоты, затем споласкивать в нескольких сменах водопроводной воды и оставлять на 16—18 часов в дистиллированной воде. Три раза споласкивать дистиллированной водой и в течение 2 часов кипятить в ней. Хорошо протереть ершом, прополаскать в трех сменах дистиллированной воды, а затем высушить в сушильном шкафу.
Грязное стекло, бывшее в употреблении, автоклавируют или кипятят в 0,5% растворе NaOH, затем очищают ершом в том же растворе. Споласкивают в нескольких сменах водопроводной воды и оставляют в ней на 16—18 часов и дальше обрабатывают как новое после воздействия кислоты и ополаскивания водопроводной водой.
Новые резиновые пробки кипятят 1 час или больше в 5% растворе двууглекислой соды и затем промывают несколько раз в горячей водопроводной воде и кипятят каждый раз по 1 часу в 6—7 сменах дистиллированной воды. Пробки, бывшие в употреблении, автоклавируют или кипятят 1 час. Очищают щеткой и прополаскивают несколько раз водопроводной и один раз дистиллированной водой. Затем пробки кипятят в дистиллированной воде 1 час и споласкивают в трех сменах дистиллированной воды, стерилизуют в автоклаве.
В Московском научно-исследовательском институте вирусных препаратов для обработки стеклянной посуды используют некоторые моющие смеси, хорошо обезжиривающие стекло (ОП-Ю, тринатрий фосфат, гексаметафосфат натрия).
Очень чистое стекло получается при обработке по следующей схеме. Посуду перед обработкой моют в горячей воде с помощью ершей, затем замачивают 20—30 минут в моющем растворе (на 10 л кипящей воды 10 г О.П-Ю и 15 г тринатрия фосфата).
Раствор сливают, посуду споласкивают теплой водой и укладывают в кипятильную ванну с раствором, состоящим из 5 л горячей воды, 18 г кальцинированной соды и 4 г гексаметафосфата натрия, и кипятят 20 минут. После кипячения посуду промывают теплой водой с ершом, 1—2 раза споласкивают в 0,1;% растворе соляной кислоты, 4—5 раз в водопроводной воде и 5—6 раз в дистиллированной. Посуду сушат в сушильном шкафу при 80°.
Пробки моют горячей водой, загружают в кипятильную ванну с моющим раствором (на 10 л воды 30 г двууглекислой соды) и кипятят в течение 1 часа. Промывают водопроводной водой и кипятят в ней с 10% раствором соляной кислоты (на 12 л воды 30 мл HCI). Затем пробки промывают в проточной водопроводной воде в течение 3 часов, споласкивают дистиллированной водой и сушат.
Стеклянную посуду и пипетки стерилизуют в течение Р/2—2 часов сухим жаром при 180—200°.
Резиновые пробки, трубки, а также стеклянную посуду стерили-члллт —9 чягя яптпклавипованием под давлением 2 атм, (130е).
ТРЕБОВАНИЯ К КАЧЕСТВУ ДИСТИЛЛИРОВАННОЙ
ВОДЫ
Большое влияние на успех культивирования тканей может оказывать и качество дистиллированной воды, используемой для приготовления питательных сред и растворов, а также для заключительного споласкивания после мойки стеклянной посуды для культивирования тканей. В связи с этим проводились специальные исследования по изучению качества воды и разработке методов ее контроля.
Необходимо отметить, что существующие методы контроля дистиллированной и бидистиллированной воды, которые рекомендует Государственная Фармакопея, недостаточны в условиях производства питательных сред и растворов, применяемых при культивировании ткани, ввиду их малой чувствительности к следовым количествам некоторых примесей, особенно металлов. Чувствительность тканевых культур к ионам металлов (меди, цинка, свинца и других) общеизвестна.
Для контроля воды, используемой в производстве питательных сред и растворов, которые применяют при культивировании ткани, Г. А. Смирновой (1959) были подобраны реакции, позволяющие колориметрическим методом не только качественно, но и количественно определять наличие металлов, присутствующих в воде в незначительных концентрациях.
Определение меди. В основу определения меди в воде был взят микрометод (С. С. Крапивина, М. В. Алексеева, А. Б. Иорданская, 1957), разработанный для анализа атмосферного воздуха и модифицированный Г. А, Смирновой применительно к анализам дистиллированной и бидистиллированной воды. Метод основан на способности солей меди образовывать с диэтилдитиокарбаматом натрия желто-коричневый коллоидный раствор диэтилдитиокарба-мата меди. По интенсивности окраски определяют содержание меди. Реакцию проводят в присутствии двунатриевой соли этилен-диаминтетрауксусной кислоты (трилон Б). Метод специфичен. Присутствие цинка, железа, свинца и марганца определению не мешает. Чувствительность метода 0,1 рг/мл.
Реактивы 1. Стандартный раствор меди. Раствор А — 0,0196 г CuSC>4*5H20 растворяют в бидистиллированной воде в мерной колбе на 500 мл. 1 мл такого раствора содержит 10 рг меди. Раствор Б—10 мл раствора А вносят в колбу на 100 мл и доводят водой до метки. 1 мл такого раствора содержит 1 цг меди.
