Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
В 20-х годах Каррель (1924) использовал культуру тканей для выращивания вируса саркомы Роуса.
В дальнейшем культура тканей была испытана для размножения различных вирусов. Так, Паркером и Неем (Рагкег, Nye, 1925), Гильдемейстером с сотрудниками (Gildemeister, Haagen, Scheele, 1929) и Риверсом (Rivers, 1929) был выделен вирус герпеса. Советскими учеными А. И. Тогуновой и О. Н. Бронштейн (1935) с помощью тканевых культур был вы-делен от больных людей возбудитель ветряной оспы. П. В. Смирновым, Ю. П. Тутышкиной, Н. Е. Рязанцевой и 3. Н. Ступи-ной (1935) проведено выделение и культивирование вируса кори.
Райк, Шаффер (RaKe, Shaffer) в 1941 г. выделили вирус кори из носоглоточных смывов методом тканевых культур.
Фрэнсис, Магил (Francis, Magill, 1935) и Смит (Smith, 1935), используя метод культур тканей, выделили вирус гриппа.
А. Н. Лозовая (1942) в 1937 г. выращивала вирус гриппа в культуре тканей куриных эмбрионов.
Тканевые культуры были применены для приготовления различных вакцин. Так, Мейтланд и Мейтланд (Maitland, Maitland, 1928), Ли, Риверс (Li, Rivers, 1930), А. А. Кронтовский с сотрудниками (1933) и А. И. Тогунова и др. (1934) получили вирус осповакцины в значительных количествах и испытали возможность использования его для вакцинации детей против оспы.
Однако, несмотря на успешные опыты по выращиванию тканей вне организма, этот метод не нашел достаточно широкого применения до 40-х годов из-за отсутствия надежных средств, предотвращающих бактериальную инфекцию культур.
Только открытие антибиотиков и их использование позволили применить этот ценный метод во многих областях экспериментальной биологии.
Кроме того, широкому применению в вирусологических исследованиях метода тканевых культур препятствовало отсутствие возможности индикации вируса непосредственно в зараженных культурах и необходимость прибегать для этих целей к заражению культуральным материалом восприимчивых животных или исследованию этого материала в различных пробирочных реакциях.
Открытие Хуангом (Huang, 1943) способности вируса западного лошадиного энцефаломиелита, Эндерсом, Уеллером и Роббинсом (Enaers, Weller, Robbins, 1949) способности вируса полиомиелита, а позже и другими исследователями в отношении МНОГИХ ВИРУСОВ человека И ЖИВОТНЫХ вызывать специфическую деструкцию, так называемый цитопатогенный ^эффект, клеток за^
вируса в культурах и способствовало широкому внедрению метода тканевых культур в вирусологические исследования.
В процессе развития метода разрабатывались различные способы приготовления культур тканей.
Очень важным в этой области следует признать разработку методов трипсинизации тканей и получение однослойных культур клеток.
По основному, принципиально важному признаку все методы культивирования тканей вне организма делятся на две группы.
К одной группе относятся методы, которые позволяют получить лишь переживание ткани, — это так называемые культуры переживающих тканей.
Другая группа объединяет методы, при использовании которых получаются культуры растущих клеток.
В настоящее время наибольшее распространение и применение в вирусологических исследованиях нашли культуры растущих клеток.
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ТКАНЕЙ
ТРЕБОВАНИЯ В ОТНОШЕНИИ СТЕРИЛЬНОСТИ МАТЕРИАЛОВ
Имеется много факторов, влияющих на успех культивирования тканей in vitro. В этой связи в первую очередь необходимо остановиться на бактериальных загрязнениях культур тканей, которые чаще всего мешают в работе. Все растворы, питательные среды, ткани и посуда, используемые при приготовлении культур, должны быть стерильными. За исключением тканей, которые контролируются ретроспективно, все составные части культур до использования испытываются на стерильность путем посева в бактериолог гические среды.
Кроме обычных методов стерилизации фильтрованием (рас-* творы, питательные среды), автоклавированкем (посуда, пробки, некоторые растворы), широко применяется включение с профилактическими целями в состав питательных сред и растворов различных антибиотиков. Антибиотики в высоких концентрациях используются также для предварительной обработки заведомо загрязненных материалов, таких, как, например, ткани, получаемые при забое животных на мясокомбинатах, т. е. когда не обеспечивается стерильное получение материала.
Вся работа с культурами должна проводиться при тщательном соблюдении правил асептики в специальных помещениях (боксы, операционные), обеспечивающих стерильные условия работы. В боксе, в котором производится приготовление культур, не рекомендуется проводить какие-либо работы с инфекционным или загрязненным материалом.
В настоящее время имеются все возможности для создания необходимых стерильных условий в боксах и операционных. Это достигается, кроме обычных приемов влажной дезинфекционной обработки помещений, оснащением боксов бактерицидными лампами (БУВ-15, БУВ-30) и установками, подающими в бокс стерильный воздух. На последнем, как заслуживающем особого внимания, мы остановимся несколько подробнее.
