Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
1 — набингая колонка; 2 — детектор по теплопроводности; 3 — дозатор-испаритель; 4 — терморегулятор; S — блок питания детекгора но теплопроводности; 6 — записывающий потенциометр; 7 ¦— система подготовки газа-носителя, водорода и воздуха; S — баллон с газом-носителем; S — нламенно-иони-зационнып детектор: IO — баллон с водородом; // — баллон с воздухом; 12 - капиллярная колонка; IS — усилитель.
ценный 15%-ным раствором динонилфталата. Рабочая температура колонки 105° С при скорости газа-носителя (азота) 60 млі мин.
Пробу в камеру хроматографической колонки вводят шприцем (рис. 80) емкостью 2 мл с диаметром иглы 0,8 мм. Запаянный стеклянный капилляр с пробой вставляют в иглу шприца. Пробу взвешивают на микровесах. Проколов самоуплотнившуюся силиконовую резину, иглу шприца вводят в камеру испарения образца. При
214
Рис. 80. Устройство для ввода микроколичеств жидких проб:
/ — набивка камеры испарения образца; 2 — камера не-парения образца; 3 — самоуплотняющаяся силиконовая резина; 4 — проба жидкости; 5 — шприц; 6 — стеклянный капилляр с запаянным верхним концом; 7 — поршень.
движении поршня вниз обламываются концы капилляра и избыточным давлением в шприце проба выталкивается из капилляра в камеру хроматографической колонки, где разделяются карбонильные соединения.
Идентификация полученных хромато-графических пиков производится расчетом индексов удерживания по методу Ковача с последующим сравниванием времени удерживания (по литературным данным).
Содержание отдельных компонентов определяют методом нормализации площадей под хроматографическими пиками (см. стр. 212).
Количественное содержание карбонильных соединений можно рассчитать по формуле
RTMc.\m Кс=~~м~п—мф'
где R — соотношение площади пика свободного карбони-ла к общей площади карбонилов; T — общая масса фе-нилгидразона, мг{л\ Мс — молекулярная масса карбо-нила; M11 — молекулярная масса гидразона.
Определение свободных жирных кислот в сырной массе из овечьего молока (no М. Аязбековой)
В ступку помещают 500 г сырной массы, которую предварительно подкисляют до pH 1,9 50%-ной H2SO4. В ступку добавляют 15 мл гексана, 25 мг гептановой и 250 мг гептодекановой кислот, хорошо перемешивают. Массу переносят в стаканчики центрифуги, нагревают 30 мин при 40—45° С в водяной бане и центрифугируют 30 мин (30000 об/мин). Полученный слой жира 25 мин перемешивают с анионообменной смолой АВ-17-8 ч. с.
215
и обрабатывают гексаном, дважды абсолютным этанолом и дважды абсолютным метанолом.
Обработанную смолу с жиром 25 мин перемешивают с HCl в метаноле, переносят в делительную воронку, промывают холодной водой и охлаждают до 2° С. Затем экстрагируют хлористым этилом и водой при температуре 2° С в несколько приемов. Объединенные экстракты хлористого этила сушат безводным свежепрокален-ным сульфатом магния не менее 8—10 ч при 20° С. Отогнав хлористый этил, метиловые эфиры свободных жирных кислот разделяют на хроматографе VX-1.
Для разделения используют медную колонку плоской спиральной формы, заполненную твердым носителем (целит-545) с нанесенной жидкой фазой (15% полиэти-ленгликоль сукцината).
Газ-носитель H2, давление газа на входе 1,4 ат, на выходе 0,4 ат. Образцы метиловых эфиров вводят микрошприцем в пробоотборник в количестве 3 мкл. Скорость ленты самописца 300 мм/ч. Эфиры жирных кислот разделяются за 20 мин. При хроматографировании используют две колонки при разных температурах. Одно введение пробы производят при 95° С, а другое — при 195° С. Метиловые эфиры жирных кислот d—C8 анализируют ¦при низкой температуре при стандарте С7, а кислот Сю—Ci8— при высокой и стандарте С17.
Идентификацию компонентов проводят следующим образом. Получают хроматограмму исследуемой массы. Готовят смесь анализируемой пробы с чистой кислотой, наличие которой предполагается в пробе, и снимают хроматограмму. При добавлении кислоты, имеющейся в анализируемой пробе, на хроматограмме получается увеличение соответствующего пика; если же предполагаемая кислота отсутствует, появляется новый пик.
Для количественного определения жирных кислот устанавливают коэффициенты отношения площадей пиков эфиров сырной массы к площадям пиков эфиров свободных жирных кислот. Около 10 мг каждой жирной кислоты и сырной массы прибавляют к 25 мг минерального масла. Минеральное масло растворяют в гексане и проводят все процессы образования метиловых эфиров в газо-жидкостной хроматографии. Соответствующие коэффициенты для каждой кислоты вычисляют из полученных площадей пиков метиловых эфиров.
216
ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
(по Е. Надольяку)
При тонкослойной хроматографии компоненты исследуемого раствора перемещаются в тонком слое сорбента, нанесенного на стеклянную пластинку. Схема прибора для подготовки пластин к тонкослойной хроматографии приведена на рис. 81.
Он состоит из металлического стола или металлической доски с ровной поверхностью и бортиками, не
J і Z
S
Рнс. 81. Прибор для тонкослойной хроматографии; с — поперечный разрез станка при наложении тонкого слоя; б— положение стеклянных пластинок и станка:
