Аффинная хроматография - Аберкромби Д.
ISBN 5-03-000480-7
Скачать (прямая ссылка):
Шарики трисакрила (30 мл) обрабатывают 25%-ным (масс/об.) тетрафтороборатом цинка (22,5 мл) и эпихлорогид-рином (60 мл) при 8O0C в течение 3 ч при осторожном перемешивании. По охлаждении реакционной смеси шарики промы-
28
Глава J
вают дистиллированной водой и вновь суспендируют в 2,0 іМ. аммиачном растворе хлорида аммония (pH 9,0; 100 мл).
Перемешивание продолжают еще 16 ч при комнатной температуре, шарики промывают дистиллированной водой и хранят при 40C в 0,02%-ном (масс/об.) NaN3.
7. ГИДРОКСИАЛКИЛМЕТАКРИЛАТНЫЕ ГЕЛИ
Гидрофильные гидроксиалкилметакрилатные гели, предложенные Вихтерле и Лимом [23], могут быть получены полимеризацией суспензии гидроксиалкиловых эфиров метакриловой кислоты и алкилендиметакрилата. Путем изменения соотношения концентраций мономера и инертных компонентов можно менять в широких пределах число реакционноспособных групп, пористость и удельную поверхность геля [24]. Структура геля представлена на рис. 8.
Под торговым названием «сферой» эти гели производят фирмы Lachema (ЧССР) и Realco Chemical Со. (США). Гели об-
CH3 CH3 CH3 ї CH3
-С-CH2 —С-CH7 —С-CH7 —C-
с со со со
О OCH2CH2OH OCH2CH2OH 6
CH2 CH2
CH2 CH2
I
0 о
СО .CH3 CH3 со
-С-CH2 —С-CH2 —С-CH2 —с-
1 I I I CH3 СО СО CH3
OCH2CH2OH OCH2CH2OH Рис. 8. Структура гидроксиалкилметакрилатного геля.
разуют регулярные шарики с превосходной химической и физической устойчивостью. Они хорошо выдерживают хроматографию под давлением и не меняют своей структуры после нагревания в течение 8 ч в 1,0 M растворе гликолята натрия при 1500C после кипячения в течение 24 ч в 20%-ной (об./об.) соляной кислоте. Сфероны биологически инертны и, подобно полиакрил-амидным гелям, не атакуются микроорганизмами. Их можно использовать в органических растворителях. Гидроксильные группы геля имеют те же свойства, что и гидроксильные группы агарозы.
Получение матриц
29
8. ПОЛИАКРИЛАМИД-АГАРОЗНЫЕ ГЕЛИ
Ультрогели AcA представляют собой полиакриламид-агароз-ные гели (рис. 9) с различной и стандартизированной пористостью в соответствии с типом геля. Выпускается пять типов АсА-гелей с различной пористостью, представляющих собой трехмерную полиакриламидную решетку с заключенным в ней агарозным гелем. Для этих гелей область фракционирования по молекулярной массе находится в интервале 1000ч-1 200 ООО. Эти гели характеризуются наличием двух типов химических групп — гидроксильных групп агарозы и амидных групп поли-акриламида, которые могут быть модифицированы для иммо-
Рис. 9. Схематическое изображение матрицы ультрогелей AcA,
билизации лигандов. Шарики ультрогеля обладают более жесткой структурой и поэтому менее подвержены действию давления, чем обычные гели, что обеспечивает более высокие скорости потока.
Из ультрогеля AcA 44 получают магногель AcA 44—носитель с магнитными свойствами. Включение внутрь полиакрил-амид-агарозных шариков 7% (масс/об.) оксида железа (Fe3O4) позволяет им взаимодействовать с магнитным полем. Этот гель используется в микроанализе и для получения продуктов в гетерогенной среде, содержащей частицы в суспензии. Использование магногеля в микроаналитических определениях позволяет исключить многочисленные стадии центрифугирования, применяемые в обычных анализах.
9. ИММОБИЛИЗАЦИЯ ФЕРМЕНТОВ НА ТРУБКАХ ИЗ ПОЛИВИНИЛАЦЕТАТЭТИЛЕНА
9.1. Введение
Манеке [25] описал различные реакционноспособные носители для иммобилизации ферментов; в качестве нерастворимых исходных материалов он использовал полимерные продукты,
агароза
полиакриламид
зо
Глава 1
содержащие поливиниловый спирт: гели поливинилового спирта, поперечно-сшитые терефталевым альдегидом; гидролизован-ные шарики поперечно-сшитого поли(винилацетата); трубки из поливинилацетатэтилена, покрытые поливиниловым спиртом, и главным образом синтетическую древесную целлюлозу, содержащую поливиниловый спирт. В аффинной хроматографии нашли применение другие носители, а именно найлон, полистирол, бумага, алгинат натрия и нерастворимые белки.
Трубки из поливинилацетатэтилена выпускаются фирмой Boehringer Mannheim.
9.2. Методы получения реакционноспособных трубок из поливинилацетатэтилена (рис. 10)
9.2.1. Активация трубок из поливинилацетатэтилена. Трубку из поливинилацетатэтилена (I, длина 500 см, внутренний диаметр 0,2 см) (рис. 10) заполняют 20%-ным (масс./об.) раствором NaOH (25 мл). Раствор многократно пропускают через трубку в течение 2 ч при 40 0C с помощью перистальтического насоса.
9.2.2. Модификация внутренней поверхности трубки эпокси-пропоксибензальдегидом с образованием продукта III. Гидро-лизованную трубку II заполняют с помощью перистальтического насоса I1O M раствором 4-(2,3-эпоксипропокси)бензальдегида (25 мл) в диоксане и с помощью того же насоса рециркулируют раствор через трубку в течение 2 ч при комнатной температуре. Трубку промывают последовательно диоксаном и водой.
9.2.3. Покрытие внутренней поверхности трубки поливиниловым спиртом с образованием продукта IVa. Трубку IH обрабатывают водным раствором (2,2% масс/об; 0,5 M по виниловому спирту) поливинилового спирта (20 мл) и концентрированной HCl (0,2 мл) в течение 15 ч при 25 °С с циркуляцией раствора. Трубку промывают водой.
