Методы практической биохимии - Уильямс Б.
Скачать (прямая ссылка):
Исследование на хлоропластах. Применяя специальным образом освещаемый электрод Кларка, можно изучать также выделение кислорода водорослями, хлоропластами и фракциями хлоропластов, обогащенными фотосистемой II. Начальные стадии выделения кислорода при освещении изучают с помощью открытого кислородного электрода; при этом на поверхность электрода наносят тонкий слой хлоропластов и дают короткие вспышки света.
7.9. С02-чувствительный электрод
Конструкция этого электрода не имеет ничего общего с кислородным электродом, а основывается на модификации оборудования для измерений pH. С02-чувствительный электрод состоит из;
Гл. 7. Потенциометрия, электрометрия и полярография 243
стеклянного рН-электрода, покрытого насыщенной жидкостью целлофановой мембраной, которая в свою очередь покрыта тонкой резиновой пленкой, проницаемой для двуокиси углерода. Диффундирующая внутрь пленки двуокись углерода приходит в равновесие с тонким слоем электролитической жидкости. При этом происходит изменение pH, которое регистрируется рН-метром (рис. 7.14).
У первых электродов такого рода постоянная времени была довольно большой и, кроме того, зависимость между концентрацией двуокиси углерода и показаниями прибора была логарифмической. Применение силиконовой резиновой мембраны позволило уменьшить постоянную времени, а аналоговый преобразователь дал возможность получить на выходе линейную зависимость. Прибор легко калибруется стандартными растворами бикарбоната или при различном парциальном давлении двуокиси углерода. До настоящего времени этот электрод использовали не так широко, как кислородный, хотя он и применялся в клинической биохимии и физиологии.
7.10. Рекомендуемая литература
Beechey R. В., Ribbons D. W., Oxygen electrode measurements, in: Methods in Mic obiology, Vol. 6B. Ed by Norris J. R. and Ribbons D. W., Academic Press, London, 1972. (Подробно рассмотрены конструкция и применение кислородных электродов.)
Jacobsen С. F., Lionis Linderstrom-Lang К., Ottesen М., The pH-Stat and its use in biochemistry, in: Methods of Biochemical Analysis, Vol. 4. Ed by Glick D., Wiley-Interscience, New York, 1957.
Lessler M. A., Brierley G. P., Oxygen electrode measurements in biochemical analysis, in: Methods of Biochemical Analysis, Vol. 17. Ed by Glick D., Wiley-Interscience, New York, 1969. (Общие сведения о применении кислородных электродов в практической биохимии.)
Mattock G., pH Measurements and Titration (Physical Processes in the Chemical Industry, Vol. VI), Heywood, London, 1961. (Принципиальная основа и практические аспекты измерения pH и титрования.)
Morris J. G., A Biologist’s Physical Chemistry, 2nd end, Contemporary Biology Series, Edward Arnold, London, 1974. (Детально рассмотрены вопросы окисления и восстановления.)
S*
244 Часть III. Аналитические методы
Nicholts D. G., Garland P. B., Electrode measurements of carbon dioxide, ini Methods in Microbiology, Vol. 6B. Ed. by Norris J. R. and Ribbons D.W.* Academic Press, London, 1972.
Peel J. L., The use of electron acceptors, donors and carriers, in: Methods in Microbiology, Vol. 6B. Ed by Norris J. R. and Ribbons D. W., Academic Press, London, 1972. (Особенности применяемых методов и предосторожности, которые необходимо соблюдать при трактовке полученных результатов.)
Weast R. С., Handbook of Chemistry and Physics, 54th edn., The Chemical Rubber Co., Cleveland, Ohio, 1974.
Zuman P., Polarography of biomolecules, in: Experimental Methods in Biophysical Chemistry. Ed. by Nicholau C. J., Wiley, London, 1973.
Дополнительная литература
Ионоселективные электроды. Под ред. Р. Дарста, пер. с аигл., изд-во «Мир», М., 1972.
Глава 8
МАНОМЕТРИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
8.1. Введение
В ходе многих процессов, протекающих в биологических системах, происходит обмен этих систем кислородом и (или) двуокисью углерода с окружающей средой. Измерение скорости и уровня этого обмена дает простой, удобный и чувствительный метод исследования таких систем. В то время как кислородный и С02-чувст-вительный электроды просто регистрируют изменения в напряжении либо кислорода, либо углекислоты соответственно, манометрические методы могут быть использованы для измерений поглощения или выделения и двуокиси углерода, и кислорода.
Кислородный электрод способен регистрировать меньшие, чем в манометрии, изменения в напряжении кислорода и поэтому особенно ценён при исследований процессов, протекающих в митохондриях, хлоропластах или с участием таких изолированных ферментов, как моноаминооксидаза. Кроме того, у кислородного электрода меньше постоянная времени и его проще приспособить для непрерывной регистрации изменений концентрации кислорода. Манометрия как метод исследования подходит для тех случаев, когда имеют дело с большими количествами материала, и применяется для изучения клеточных органелл, клеточных суспензий, тканевых срезов и гомогенатов, семян и даже целых насекомых. Манометрия позволяет также непрерывно следить за обменом кислорода и двуокиси углерода, причем величина этого обмена не зависит от парциального давления газа в начале эксперимента. Эти особенности отличают манометрию от методов с применением кислородного электрода и позволяют изучать газообмен в присутствии смесей других газов.
