Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
часть хроматина остается в высококонденсированном состоянии в хромомерах,
которые траскрипционно неактивны.
__Д. У личинок мух в секреторных клетках некоторых типов все копии
гомологичных хромосом, синтезированных за несколько циклов
репликации, остаются рядом друг с другом, что приводит к образованию
гигантской полиплоидной хромосомы.
__Е. Изучение хромосомных пуфов показало, что петельный домен,
который, как полагают, должен сложиться, чтобы образовался
хромосомный диск, в ходе транскрипции может деконденсиро-ваться как
отдельная единица.
_Ж. Данные классической генетики вместе с последними результатами
молекулярно-биологических исследований показывают, что каждый диск на
политенной хромосоме, вероятно, соответствует одному гену.
__3. При обработке ядер из различных клеток ДНКазой I в определенной
концентрации разрушаются преимущественно те последовательности ДНК,
которые в клетках данного типа активно транскрибируются.
__И. В активном хроматине нуклеосомы избирательно связывают два
небольших близкородственных хромосомных белка HMG14 и HMG17.
_К. Транскрипционно неактивные области хромосом представляют собой ДНК в
конденсированной форме, относительно устойчивой к нуклеазам; эту форму
ДНК называют гетерохроматином.
9-13 Вы изучаете транскрипцию на хромосомах типа ламповых щеток у
тритона Triturus, вводя 3Н-уридин в ооциты и определяя через равные
промежутки времени радиоактивную РНК методом радиоавтографии. Сначала вы
исследуете самые большие петли. Метка включается постепенно вдоль всей
петли, как это показано на рис. 9-10. Процесс мечения всей петли занимает
14 сут. Проведя
138 Глава 9
Рис. 9-10. Радиоавтография гигантской хроматиновой петли в препарате
хромосом типа ламповых щеток из тритона (задача 9-13). Стрелками указано
распространение меченых областей вдоль петли в разные моменты времени
после введения в ооцит меченого уридина.
Направление
полимеризации
типа ламповых щеток
Рис. 9-11. Схематическое изображение хроматиновой петли, представляющей
собой одну транскрипционную единицу (задача 9-13). Продвижение молекул
РНК-поли-меразы вдоль петли отражено в удлинении новосинтезированных
цепей РНК, связанных с каждой полимеразой.
Ф
¦**
¦""
mWZ.
о
€
<•
••••Л-:.
2851 214)
Р D Р
<"Л
Немеченая
петля
Время, сутки после введения ^Н-^
"Sf?
_Ж-
14
Полностью меченная петпя
сравнение его с процессом мечения маленьких петель, гораздо чаще
встречающихся в хромосомах типа ламповых щеток, вы удивлены результатами:
петли меньшего размера метятся равномерно даже за очень короткие
промежутки времени. При увеличении времени инкубации интенсивность
мечения увеличиваете!! равномерно вдоль всей петли.
Многие петли в хромосомах типа ламповых щеток представляют
собой отдельные единицы транскрипции, в которых РНК-полимераза начинает и
заканчивает синтез у основания петли, кап показано на рис. 9-11. Если
петля, которую вы изучаете, представляет собой отдельную единицу
транскрипции, то как будет происходить мечение петли: постепенно, как в
случае больших петел (рис. 9-10), или одновременно по всей длине, как в
петлях меньшего размера?
9-14 Гигантские политенные хромосомы Drosophila melanogaster давне
привлекают внимание генетиков, потому что характерная для ниг
исчерченность создает различимую глазом карту генома. Диен содержат, по-
видимому, большее количество ДНК, чем междиско-вые участки. Возникает ли
эта разница в связи с тем, что в диска! ДНК реплицируется более
интенсивно, чем в междисковых участках, или же вся ДНК реплицируется
одинаково, но уложена она таким образом, что диски содержат больше ДНК,
чем меж-дисковые участки?
Вы можете найти ответ на этот вопрос, поскольку получил
последовательный ряд клонов, который охватывает отрезок длиной 315 т. п.
н. ДНК дрозофилы, включающий примерно 12 диског и междисковых участков. В
качестве зондов для гибридизации вн можете использовать радиоактивно
меченные фрагменты эти клонов, чтобы определить количество
комплементарной им ДНК; присутствующей в диплоидных тканях и политенных
хромосомах; Вы выделяете ДНК из диплоидных тканей и политенных хромо сом,
обрабатываете равные количества ДНК рестриктазами, взя тыми в различных
сочетаниях, разделяете фрагменты путем гель-электрофореза и переносите их
на нитроцеллюлозные фильтры до" гибридизации. В каждом случае набор
фрагментов, образовавших! ся при рестрикции, одинаков для ДНК из
диплоидных ткане| и политенных хромосом, как показано на рис. 9-12. Вы
