Биология развития млекопитающих - Манк М.
ISBN 5-03-001333-4
Скачать (прямая ссылка):
Лииня Литературный источник
(C57BL/10ScSn/Ola а X [18]
xCBA/Ca/01a<?)FI
(C57BLXCBA Тб T6)F[ [19]
(C57BL X СВА-LAC) F i [20]
(C57BL/10JXSJL/J)F, [21]
В6А F, [17]
(C57XSJL) F, [17]
') 50% нлн более оплодотворенных яиц развиваются до ;гадни бластоцнсты.
извлечь из яйцевода на поздней 2-клеточной стадии (примерно 48 ч после
чХГ), развитие in vitro в простой среде не нарушается. Есть, однако,
несколько линий (главным образом инбред-пых или гибридов между ними),
яйца и эмбрионы которых на 2-клеточНой стадии не блокируются (табл. 2.2).
Мы в своей работе используем гибридных самок Fj от скрещивания
(C57BLXCBA/Ca).
Сравнение линий мышей, имеющих и не имеющих двуклеточный блок, показало,
что свойство эмбрионов останавливаться в развитии на стадии двух клеток
определяется исключительно генотипом яйца и не зависит от отцовского или
эмбрионального генома [18]. Наличие феномена двуклеточного блока делает
предпочтительным использование в экспериментах яиц неб локирующихся линий
(хотя в качественном отношении переход от одноклеточной к двуклеточной
стадии у линий с блоком и без него не отличается) [18]. Если же в опыте
все-таки участвует блокирующаяся линия, следует обратить особое внимание
на то, чтобы эмбрионы 2-клеточной стадии извлекались из яйцевода в
достаточно позднем периоде второго клеточного цикла и их нормальное
развитие в бластоцисту in vitro было обеспечено. Этот момент
соответствует приблизительно 36- 40 ч после чХГ, но его лучше определить
экспериментально для каждой линии, с которой проводится работа.
2.3. Морулы
Термин "морула" неточен, но обычно используется для обозначения
компактного агрегата бластомеров (рис. 2.1, 21, 22). Понятие объединяет
все стадии развития от компактпзиро-
3*
36
Глава 2
Рис. 2.2. Ключевые моменты процесса развития (и его некоторые аномалии) и
формирование бластоцисты. Временные характеристики представлены в табл.
2.1 I. 8-клеточные эмбрионы перед компактизацией. Стрелка указывает на
эмбрион, начавший компактизацию. 2. Компактизирэванные эмбрионы,
представленные менее чем 8 клетками. Ксмпактизания эмбрионов, состоящих
Эксперименты с предимплантационными эмбрионами мыши___________37
ванной 8-клеточной до 16- и 32-клеточной стадий и начала формирования
бластоцеля. Наблюдения над развитием эмбрионов in vitro в течение этого
периода позволяют представить процесс более детально: на 8-клеточной
стадии бластомеры уплощаются в местах контакта друг с другом
(компактизируются), но в течение митоза, ведущего к 16-клеточной стадии,
декомпактизи-руются и затем компактизируются снова (рис. 2.2, 4-6,
периодизацию см. в табл. 2.1). Поздние морулы обычно соответствуют 16-32-
клеточным эмбрионам, в которых еще нет полости; именно на этой стадии
развития (около 84 ч после чХГ) оии проходят место соединения яйцевода с
маткой. Если эмбрионы извлекаются именно в этот момент, целесообразно
промывать не только яйцеводы, но также и оба рога матки (см. разд. 2.4).
2.4. Бластоцисты
У эмбрионов, входящих в матку, кавитация (формирование) бластоцеля
начинается спустя 94 ч после инъекции чХГ. В это время они состоят
примерно из 32 клеток (т. е. большинство клеток достигло конца своего
пятого клеточного цикла, табл. 2.1). По мере того, как клетки пройдут
следующие два цикла, бластоциста окончательно формируется (рис. 2.1,
23-25,
рис. 2.2; 9, 10). Когда число клеток достигает приблизительно 128 (120 ч
после чХГ), блестящая оболочка утоньшается, блас-
из меньшего числа клеток, чем обычно, свидетельствует о том, что этэ
явление не приурочено к определенному клеточному циклу. Несмотря на
возможную жизнеспособность этих эмбрионов, их лучше изъять из основной
популяции.
3. Неиитегрированные бластомеры компактизированных эмбрионов.
Компакти-зация продолжается в течение 4-5 ч и не происходит одновременно
со всеми бластомерами, в результате эмбрион может иметь бластомеры, не
включенные в основную клеточную массу. Все эмбрионы, у которых
компактизация не завершилась через 8 ч после наступления 8-клеточиой
стадии, должны быть отброшены. 4-6. Декомпактизация компактизированных 8-
клеточных эмбрионов при переходе к 16-клеточной стадии и последующая
рекомпактизация после деления (см. разд. 3.1). Блестящая оболочка
удалена, поэтому изменения поверхности видны более четко (фотографии
любезно предоставлены Джулией Чишолм): 4 - компактизированные 8-клеточные
эмбрионы; 5 - декомпактизация 8-клеточиых эмбрионов; 6 -
рекомпактизированные 8-клеточные эмбрионы. 7. Поляризация поверхностных
микроворсинок на отдельных бластомерах 8-клеточного эмбриона, наблюдаемая
в сканирующем электронном микроскопе (см. разд. 4.1.2). 8. Поляризация
поверхностных микроворсинок на паре бластомеров 8-клеточной стадии,
выявляемая окрашиванием ФИТЦ-КоиА (см. разд. 4.1.1). 9. Эмбрионы через
несколько часов после начала скапливания жидкости. У нормальных эмбрионов
может иметь место формирование более чем одной полости (указано
