Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
5. Коммерческие препараты сред для оптимизации условий роста клеток млекопитающих
Можно выделить три категории сред, предлагаемых различными фирмами для оптимизации культур клеток млекопитающих (табл. 2.3).
I. Среды с сывороточными добавками. Клетки выращиваются в основной среде, содержащей небольшое количество сыворотки и обогащенной сывороточными добавками. Такие сывороточные добавки содержат обычно инсулин, трансферрин, селенит и ростовые факторы (чаще всего ФРЭ, ФРФ и ФРСТ); названия добавок: GF, ITS, GF-3, GF-9 и SerXtend.
II. Среды с заменителями сыворотки. Клетки выращиваются в основной питательной среде (например, смесь сред RPMI 1640/DME), в которую добавлены определенные заменители сыворотки. В состав заменителей обычно входят инсулин, трансферрин, ростовые факторы (большей частью ФРЭ, ФРФ, ФРСТ) и гормоны (как правило, гидрокортизон или дексамета-зон, трииодтиронин, прогестерон). Названия заменителей: Nut-ricyte, HCGS (Hybridoma Cell Growth Supplement); CLEX, Serum Plus, Nu-Serum.
III. Бессывороточные среды. Клетки растут без добавок в этих средах (например, смесь DME/F12 в соотношении 1 : 1 по объему), в состав которых обычно входят инсулин, трансферрин, селенит, частично альбумин (фракция V), фетуин, тестостерон,
Таблица 2.3. Коммерческие препараты бессывороточных сред и добавок
Наименование Поставщик
Сывороточные QF Collaborative Research, BRL
добавки ITS Collaborative Research
SGF3 Scotts Laboratories
SGF9 Scotts Laboratories
SerXtend NEN Research Products, Hana Me
dia
Заменители сыво Nutricyte Brooks Laboratories
ротки неизвест Nu-serum Collaborative Research, BRL
ного состава Ventrex Ventrex Laboratories Inc.
Serum Plus
CLEX Dextran Products Ltd.
Заменители сыво Selectakit Gibco
ротки известно HCGS Biomedical Technologies
го состава Ultroser-G LKB, IBF
Бессывороточные HB101, HB102, NEN Research Products, Hana Me
среды HB103 dia
SF1 Northumbria Biologicals
HL-1 Ventrex Laboratories, Paesel
MEM Scotts Laboratories
IMDM Flow, Gibco, Sigma, Boehringer
Mannheim, КС Biologicals
KC-2000 КС Biologicals
Neuman & Tytell Gibco
BM-86 (Wissler) Boehringer Mannheim
MCDB 102 Gibco
MCDB 103, 104 Flow Laboratories, Gibco
этаноламин, некоторые жирные кислоты, пируват, микроэлементы. Наименования: НВ 101, НВ 102, HL-1, DME, IMDM,
КС-2000, ВМ-86 (Wissler).
6. Методы покрывания поверхности культуральной посуды биоматриксом
6.1. Покрытие поверхности культуральной посуды поли-О-лизином
При культивировании клеток, зависящих от субстрата, поверхность культуральной посуды часто покрывают положительно заряженным полимером (например, поли-О-лизином [2]).
I. Растворите поли-Е)-лизин НВг (мол. масса 3—7-104) в дистиллированной воде до концентрации 0,1 мг/мл и про-стернлизуйте (фильтрация через фильтр из ацетата целлюлозы с диаметром пор 0,22 мкм).
II. Нанесите по 0,5 мл раствора в каждую чашку Петри 60X15 мм.
III. Осторожно вращая чашку, распределите раствор равномерно по всей поверхности.
IV. Через 5 мин полностью удалите раствор с помощью пастеровской пипетки.
V. Промойте чашку 1,5 мл дистиллированной воды, осторожно ее вращая, и удалите воду пастеровской пипеткой.
VI. Необходимо полностью удалять все растворы, поскольку свободный полилизин может оказывать цитотоксическое действие.
VII. Чашки могут быть использованы сразу или после высушивания и хранения.
VIII.Чашки, покрытые нестерильным раствором, могут быть стерилизованы путем ультрафиолетового облучения.
6.2. Выделение коллагена и покрытие поверхности культуральной посуды
Коллаген типа I может быть получен с помощью метода Строма и Микалопулоса [19] из сухожилий, связанных с позвонками хвоста крыс.
I. Разрежьте свежевыделенные или замороженные и оттаявшие хвосты продольно от основания до конца.
II. Удалите кожу и кровеносные сосуды.
III. Возьмите белые коллагеновые волокна и простерилизуйте их ультрафиолетом.
IV. Поместите 1 г коллагеновых волокон (из 3—4 хвостов) в 300 мл 0,1 М уксусной кислоты и поставьте перемешиваться при 4°С в течение 48 ч.
