Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Калибровочная проба. Ставят и измеряют так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл рабочего калибровочного раствора с содержанием 0,3 ммоль/л мочевой кислоты.
Концентрация мочевой кислоты (х) в ммоль/л составит
где E0n — экстинкция опытной пробы; Ек — экстинкция калибровочной пробы; Ск — концентрация рабочего калибровочного раствора, содержащего 0,3 ммоль/л мочевой кислоты, ммоль/л.
105
При пересчете ммоль/л в мг% полученную величину делят на 0,059 или умножают на 16,94.
Например, найденная величина мочевой кислоты составила 0,24 ммоль/л, это будет соответственно 4,06 мг%.
Источник: 55.
Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов. Принцип. Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием комплекса голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.
Реактивы: раствор натрия вольфрамата 10 %-ный; реактив Фолина; раствор натрия карбоната; раствор калибровочный мочевой кислоты 0,3 ммоль/л; раствор серной кислоты 0,35 моль/л.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; две кюветы с толщиной слоя 1 см; пипетки; шприц для отбора центрифугата; центрифуга.
Ход определения. Опытная проба. К 5 мл дистиллированной воды добавляют 0,4 мл сыворотки, 0,2 мл раствора серной кислоты, перемешивают. Затем добавляют 0,2 мл раствора натрия вольфрамата, перемешивают и через 10 мин центрифугируют при 3000 мин-1 15 мин. Отбирают 3 мл центрифугата, последовательно добавляют 0,6 мл натрия карбоната и 0,4 мл реактива Фолина, перемешивают и через 30 мин фотометрируют в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы при длине волны 670 нм.
Холостая проба. К 3 мл воды добавляют 0,2 мл раствора серной кислоты, 0,2 мл натрия вольфрамата, 0,6 мл раствора карбоната натрия и 0,4 мл реактива Фолина.
Калибровочная проба. К 5 мл воды добавляют 0,4 мл калибровочного раствора мочевой кислоты, 0,2 мл раствора серной кислоты, 0,2 мл раствора натрия вольфрамата, перемешивают. Через 10 мин отбирают 3 мл и прибавляют 0,6 мл раствора натрия карбоната и 0,4 мл реактива Фолина. Через 30 мин фотометрируют при тех же условиях, что и опытную пробу.
Концентрация мочевой кислоты в сыворотке крови (х, ммоль/л, л) составит
*=¦ -0,3,
где E0n — экстинкция опытной пробы; Ек — экстинкция калибровочной пробы; 0,3 — концентрация мочевой кислоты в калибровочном растворе, ммоль/л.
При переводе в мг% полученную величину в ммоль/л умножают на 16,94.
Источник: 43.
Клиническое значение. Мочевая кислота у птиц, а также у человека является конечным продуктом обмена пурино-вых нуклеиновых оснований, у лошадей, собак и кроликов она
106
окисляется с образованием алантоина. Мочевая кислота плохо растворима в воде, ее соли — ураты откладываются на висцеральных оболочках брюшины, внутренних органов, в суставах и моче-выводящих путях, вызывая мочекислый диатез, а при отложении в суставах — подагру. Мочекислый диатез и подагра преимущественно встречаются у птиц и человека.
В норме мочевой кислоты у кур содержится 0,23—0,47 ммоль/л, или 4—8 мг/100 мл мочевой кислоты. Повышение ее уровня в сыворотке крови у кур отмечается при избыточном протеиновом и аминокислотном кормлении, избытке нитратов, недостатке витамина А и др.
Определение креатинина в сыворотке крови по цветной реакции Яффе (метод Лоппера). Принцип. Креатинин реагирует с пикриновой кислотой в щелочной среде с образованием окрашенных соединений. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации креатинина.
Реактивы: насыщенный раствор пикриновой кислоты. Влажность товарной пикриновой кислоты 15—20 %. Кислоту не сушат! Взрывоопасна! 2 г пикриновой кислоты растворяют в 100 мл горячей (70—80 °С) дистиллированной воды при нагревании в водяной бане. Раствор оставляют стоять на 24 ч, периодически перемешивая, затем фильтруют. Реактив стоек. Хранят в темной посуде;
0,1 моль/л HCl;
основной калибровочный раствор креатинина, 10 моль/л: 113 мг креатинина доводят до 100 мл 0,1 моль/л раствором HCl. Хранят в холодильнике в посуде с притертой пробкой. Рабочий калибровочный раствор получают разведением основного калибровочного раствора дистиллированной водой в 100 раз. 1 мл раствора содержит 0,1 ммоль/л (1 мг%) креатинина;
натрия гидроксид, 2,5 моль/л (10%-ный раствор).
Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня; колбы мерные.
Ход определения. Опытная проба. 2,0 мл сыворотки смешивают с 6,0 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты. Через 5 мин пробирку помещают на 15—20 с в кипящую водяную баню, затем центрифугируют или фильтруют. К 4 мл центрифугата добавляют 0,2 мл 2,5 моль/л раствора натрия гидроксида и тщательно перемешивают. Иногда после подщелачивания раствор мутнеет вследствие выпадения фосфатов. В этом случае его следует еще раз отцентрифугировать. Затем раствор доводят до объема 10 мл дистиллированной водой. Через 10 мин (не позже) измеряют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 2 см при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы.
