Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
В лабораторию образцы крови доставляют в день взятия. Для получения сыворотки пробирку с кровью обводят тонкой спицей из нержавеющей стали и ставят в термостат при температуре 37—38 0C на 1—2 ч или оставляют при комнатной температуре для окончательного отделения сыворотки. Сыворотку сливают в центрифужные пробирки и центрифугируют 15 мин при 3000 мин '. Для исследования пригодна сыворотка без гемолиза. Анализ проводят в течение первых двух дней после взятия образцов крови.
Ход определения. В стаканчик вносят поочередно 1 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, 0,5 мл сыворотки крови, перемешивают. Из микробюретки медленно по каплям с интервалом 1—3 с в стаканчик добавляют 75 мг%-ный раствор цинка сульфата до помутнения содержимого, когда через вертикальный слой жидкости нельзя прочесть газетный текст. Записывают результат.
Клиническое значение. Воспаление легких сопровождается повышением содержания в сыворотке крови глобулинов и снижением количества альбуминов. Чем тяжелее воспалительный процесс, тем сильнее выражена диспротеинемия, тем меньше пойдет раствора цинка сульфата для осаждения грубодисперсных белков — глобулинов.
У клинически здоровых телят в возрасте 1—3 мес величина бронхолегочного теста составляет 1,7—2,7 мл, при легкой и средней тяжести бронхопневмонии — 1,5—1,3, при тяжелом затяжном течении болезни — 1,2 мл и менее. При показателе легочного теста 0,9—0,8 мл и менее прогноз болезни, по нашим наблюдениям, не-
116
благоприятный. Повышение показателя бронхолегочного теста свидетельствует о положительном лечебном эффекте (выздоровлении животного), снижение — об неэффективности лечения, усугублении патологического процесса. В случаях, когда патологический процесс в легких существенно не изменяется, показатель бронхолегочного теста остается на прежнем уровне. Источник: 35.
3.3.5. МЕТОДЫ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА
Для оценки состояния углеводного обмена определяют содержание в крови глюкозы, молочной и пировиноградной кислот, в клетках крови и печени-гликогена и других веществ. В сочетании с другими клиническими и лабораторными показателями они имеют определенное диагностическое значение. Применяют методы нагрузки галактозой, пробы с инсулином, адреналином и т. д.
Определение глюкозы в крови, моче по цветной реакции с ор-то-толуидином. Принцип. Глюкоза при нагревании с орто-то-луидином в растворе уксусной кислоты дает окрашенное соединение, интенсивность окрашивания которого пропорциональна концентрации глюкозы. Анализ проводят не позднее 24—48 ч.
Реактивы: орто-толуидин (CH3C6H4NH2, ч.), обязательно подлежит перегонке в колбе-реторте при температуре 200 0C (на песочной бане). Свежеприготовленный орто-толуидин должен быть бесцветным или слабо-желтого цвета. Экстинкция при 590—655 нм против воды не должна превышать 0,02. Реактив стоек при хранении в посуде темного стекла без доступа воздуха;
ледяная уксусная кислота (х. ч.);
20%-ный раствор трихлоруксусной кислоты;
тиомочевина (ч. д. а.);
0,2%-ный раствор бензойной кислоты. 0,2 г кристаллической бензойной кислоты растворяют в 99,8 мл дистиллированной воды. Для более быстрого растворения нагревают на водяной бане;
орто-толуидиновый реактив. В 94 мл ледяной уксусной кислоты растворяют 0,15 г тиомочевины и добавляют 6 мл орто-толуидина. Реактив стоек при хранении в холодильнике;
калибровочный раствор глюкозы для ее определения в крови жвачных животных 500 мг/л (2,777 ммоль/л) и у моногастричных животных 1000 мг/л (5,555 ммоль/л). 500 мг или 1000 мг глюкозы, высушенной до постоянной массы, растворяют в мерной колбе вместимостью 1000 мл в 0,2%-ном растворе бензойной кислоты или в воде. Экстинкция калибровочного раствора не должна давать резких колебаний, в противном случае необходимо готовить новый раствор. Хранят калибровочный раствор в холодильнике.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; колба-реторта; песочная баня; водяная баня; термос на 3—5 л; пробирки центрифужные.
117
Ход определения. Подготовка безбелкового фильтрата крови. В центрифужную пробирку вносят 5 мл 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, 5 мл цельной крови и перемешивают. Готовят все на месте в момент взятия крови у животных. Пробирки помещают в термос со льдом, доставляют в лабораторию, где пробирки помещают в центрифугу на 20—30 мин при 3000 мин-1. Верхний слой (безбелковый фильтрат) сливают в другую пробирку и в нем определяют глюкозу. (Можно, кроме того, определять неорганический фосфор и магний.) Хранят безбелковый фильтрат крови в холодильнике не более 5 дней.
Проведение анализа. В пробирку вносят 0,2 мл безбелкового фильтрата крови, 0,3 мл дистиллированной воды и 4,5 мл орто-то-луидинового реактива. Пробирку помещают в кипящую водяную баню на 8 мин (точно). Вода должна непременно кипеть. После чего сразу охлаждают до комнатной температуры под водопроводной водой. Фотометрируют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 10 мм против контроля при длине волны 580—650 нм (оранжевый или красный светофильтр).
Контроль. 0,4 мл 20%-ной трихлоруксусной кислоты, 0,6 мл дистиллированной воды, 9,0 мл орто-толуидинового реактива (на две кюветы). Параллельно готовят калибровочную пробу.
