Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Гаптоглобин связывает и транспортирует свободный гемоглобин А в клетки ретикулоэндотелия. Содержание его снижается при гепатите, гемолитической анемии, увеличивается при острых воспалительных процессах, сахарном диабете.
Церулоплазмин — медьсодержащий белок, окисляет трехвалентное железо в двухвалентное. Уровень его растет при остром воспалительном процессе, холестазе, ревматоидном артрите, снижается при циррозе печени, хроническом гепатите.
Содержание 0С2-глобулинов в крови здоровых животных незначительное.
?-Глобулины содержат два белка — трансферин и гемопексин. Трансферин участвует в транспорте трехвалентного железа, снижается его содержание при воспалительных процессах. Гемопексин переносит сывороточный гем. Уровень его падает при гемолитической анемии, заболеваниях печени, нефротическом синдроме, повышается — при воспалительном процессе.
у-Глобулины — иммунные белки. Уровень их повышается при инфекционном воспалительном процессе, а также за счет патологических белков — парапротеинов, относящихся к иммуноглобулинам. Увеличение содержания у-глобулинов, умеренное повышение уровня ?-глобулинов при заметном снижении альбуминов присуще гепатиту, токсическому гепатозу, лейкемии, злокачественным новообразованиям, воспалению легких и бронхов.
Снижение у-глобулинов отмечают у новорожденных животных при физиологической незрелости иммунной системы, иммунных дефицитах. Гипогаммаглобинемию отмечают при белковом недокорме, истощении, воздействии на организм радиации.
7*
99
Выраженное увеличение количества а-глобулинов с умеренным снижением альбуминов характерно для поздней стадии пневмонии, хронического эндокардита, холецистита, уроцистита, пиелита, токсикозов беременности.
Повышение уровня и р-глобулинов при значительном снижении количества у-глобулинов бывает при липоидном и амилоидном нефрозе, нефрите, нефросклерозе, токсикозе беременности, кахексии, злокачественных новообразованиях.
Значительное увеличение содержания у-глобулинов, умеренное увеличение р-глобулинов при заметном снижении количества альбуминов присуще гепатитам, токсическому гепатозу, кетозу, гемолитическим процессам, лейкемиям и злокачественным новообразованиям кроветворного и лимфатического аппарата.
При циррозе печени, коллагенозе и некоторых других болезнях наблюдают значительное снижение содержания альбуминов и заметное увеличение у-глобулинов. Для механической желтухи характерно уменьшение уровня альбуминов и умеренное увеличение содержания 0-2-, р- и у-глобулинов.
Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом. Принцип. Мочевина в кислой среде образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбози-да и солей железа окрашенное соединение, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию мочевины в сыворотке крови или моче.
Реактивы: трихлоруксусная кислота, 100 г/л;
диацетилмонооксим, 25 г/л воды. Реактив стабилен при хранении в темной посуде;
0,25%-ный раствор тиосемикарбозида (или 0,32%-ный раствор тиосемикарбозида гидрохлорида). Реактивы устойчивы при хранении в посуде из темного стекла;
серная кислота концентрированная;
85%-ная ортофосфорная кислота;
железа хлорат;
основной раствор железа хлората. 5 г хлорного железа растворяют и доводят дистиллированной водой до 100 мл, затем прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты;
рабочий раствор железа хлората. 1 мл основного раствора железа хлората доводят до 100 мл дистиллированной водой, добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и 1 мл 85%-ной орто-фосфорной кислоты. Хранят в темной посуде. Реактив годен в течение 2 нед;
цветной реактив. К 30 мл рабочего раствора железа хлората добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл 2,5%-ного раствора диацетилмонооксима и 0,25 мл 0,25%-ного раствора тиосемикарбозида. Цветной реактив готовят каждый раз перед употреблением;
100
калибровочный раствор мочевины — 25 мг%. 250 мг мочевины (х. ч.), высушенной в сушильном шкафу при 105 °С до постоянной массы, растворяют в мерной колбе на 1 л дистиллированной водой. В качестве растворителя можно использовать 0,2%-ный раствор бензойной кислоты (0,2 г кристаллической бензойной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды при интенсивном помешивании и нагревают на водяной бане). Стандарт, приготовленный на растворе бензойной кислоты, более стабилен, чем водный. Оба раствора при работе должны давать небольшие колебания экстинкции на ФЭКе. В ином случае требуется приготовить новый стандартный раствор.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня; центрифуга; центрифужные пробирки; алюминиевая фольга.
Ход определения. В центрифужную пробирку вносят 0,8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки крови и 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Перемешивают и оставляют на 10—20 мин, центрифугируют 15—20 мин при 3000 мин-1. В чистую пробирку вносят 0,5 мл прозрачной надосадочной жидкости (не взмучивая осадок) и 5 мл цветного реактива. Пробирку закрывают резиновой пробкой, обернутой алюминиевой фольгой, выдерживают в кипящей водяной бане 20 мин (точно) и затем охлаждают в течение 2—3 мин под струей водопроводной воды. Измерение проводят на ФЭКе при длине волны 530—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной слоя 1 см не позднее чем через 15 мин после охлаждения.