Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
ЛПОНП— липопротеиды очень низкой плотности
МДУ — максимально допустимый уровень
НАД — никатинамидадениндинуклеотид
НЭЖК — неэтерифицированные жирные кислоты
ОЭ — обменная энергия (коэффициент)
ПОЛ — перекисное окисление липидов
ПХ — пероксидаза хрена
ТДФ — тиаминдифосфат
ТМБ — тетраметилбензидин
TCX — тонкослойная хроматография
ТТГ — тириотропный гормон
XM — хилимикрон
ФЛ — фосфолипиды
ЦТК — цикл трикарбоновых кислот
4
ГЛАВА 1
ФИЗИЧЕСКИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ПРИНЦИПЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АППАРАТУРЫ В ЛАБОРАТОРНОЙ КЛИНИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ
В клинической лабораторной диагностике чаще всего применяют приборы двух групп: 1) для оптических измерений (оптоэлект-рические); 2) для электрохимических измерений. Во всех случаях аппаратура, предназначенная для получения количественного результата, должна проходить метрологический контроль.
К приборам первой группы относятся приборы, применяемые для различных измерений:
светопоглощения (абсорбции света) — колориметры и спектрофотометры;
флуоресценции — флуориметры и спектрофлуориметры;
оптической активности растворов (вращение плоскости поляризации света) — поляриметры;
интенсивности светоизлучения (интенсивности окраски пламени, эмиссии) — пламенные фотометры;
поглощения света раскаленными газами — атомные абсорбци-ометры;
светорассеяния (мутные суспензии и эмульсии — нефелометры и турбидиметры).
К приборам второй группы относятся:
различные типы потенциометров, включая pH-метры;
полярографы;
приборы для измерения показателей кислотно-щелочного состояния;
группа устройств (датчиков с терминалами) для непрерывного контроля таких параметров внутренней среды организма, как рОг, глюкозы и т. д.
Отдельной группой стоят более сложные приборы, совмещающие две функции: препаративную и измерительную. К таким аппаратам относятся хроматографы и приборы для электрофореза.
Во многих лабораторных измерительных устройствах имеются приспособления для облегчения работы лаборанта. В некоторых из них эти устройства доведены до уровня автоматических анализаторов. Последние могут быть или непрерывными, или дискретными. Непрерывный автоматический анализатор обрабатывает все
5
пробы, как на конвейере, дискретный — сериями. В обоих случаях автоматические анализаторы оборудованы компьютерами.
Колориметры, спектрофотометры и турбидиметры работают по одинаковому принципу — принципу фотометрии: сравнению интенсивности падающего на кювету света с измеряемым образцом (раствором, суспензией, эмульсией) с интенсивностью света, прошедшего через кювету. В нефелометрах используется сравнение интенсивностей падающего и рассеянного («вбок», вследствие эффекта Тиндаля) света. Для сравнения используют либо отношение интенсивностей, либо десятичный логарифм их отношения. Современные фотометры могут быть предназначены как для работы в области видимой части оптического спектра (400—700 нм), так и для УФ — ультрафиолетовой (200—400 нм) и ИК — инфракрасной (700-3000 нм).
1.1. КОЛОРИМЕТРЫ
Наиболее просты по конструкции и правилам эксплуатации колориметры — приборы, предназначенные для измерения интенсивности окраски растворов и решения некоторых близких задач. При фотометрировании цветных растворов в диапазоне оптических плотностей, не превышающих 2 (иногда 0,4), оптическая плотность прямо пропорциональна концентрации окрашивающего раствор вещества.
Во всех современных колориметрах используется фотоэлектрическая регистрация интенсивности света, прошедшего через кювету с образцом, поэтому их называют фотоэлектроколориметрами (ФЭК) или концентрационными фотоколориметрами (КФК). В большинстве случаев фотоэлектроколориметры оборудованы комплектом сменных светофильтров, что позволяет проводить измерения в широком диапазоне фиксированных значений длин волн света падающего на кювету с образцом. Возможность выделения нужного участка спектра в некоторых колориметрах решена путем использования широкополосных светофильтров, в других — узкополосных — интерференционных (10—20 нм).
Фотоэлектрический сигнал с фотодетекторов через усилитель обычно поступает либо на аналоговый терминал (показывающий стрелочный прибор), либо на цифровой; во многих современных колориметрах также предусмотрена возможность сопряжения с цифровым вольтметром, аналоговым регистрирующим прибором (самописцем), цифропечатающим устройством (ЦПУ), а также с ПЭВМ. В последнем случае в позициях каталога, соответствующих таким приборам, указывается «с RS-232-интерфейсом». Обычно дополнительные регистрирующие устройства используют в тех случаях, когда требуются кинетические измерения.
Для сравнения интенсивностей падающего и прошедшего света используют сравнение интенсивностей света, прошедшего через
6
кювету с образцом (I) и кювету сравнения (Iq) , в которой находится чистый растворитель. Кюветы, разумеется, должны быть идентичны. Поэтому сами измерения сводятся к тому, что сначала под луч света помещают кювету сравнения и специальными органами регулировки добиваются значения сигнала, соответствующего 100 % шкалы прибора. Затем под луч помещают исследуемый образец, и в этом случае показание прибора уже соответствует величине пропускания контролируемого раствора (Т, %), т. е.
