Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
На отечественном рынке представлено очень много импортных спектрофотометров, поставляемых, как правило, совместно с компьютером и соответствующим программным обеспечением и пригодных для работы в различных областях спектра. Например, такие, как спектрофотометры фирмы Shimadzu (UV-3101 PC, UV-1601), обладающие очень большими возможностями и очень дорогие. Из отечественных наиболее подходят для задач лабораторного клинического анализа следующие спектрофотометры: СФ-101, работающий в диапазоне 200—1000 нм, с фиксированной шириной щели 5 нм, со встроенным двухстрочным дисплеем; СФ-103 — од-нолучевой сканирующий спектрофотометр, работающий в диапазоне 190—1100 нм, со встроенным графическим дисплеем; СФ-201 — однолучевой сканирующий спектрофотометр, работающий в диапазоне 190—1100 нм, со встроенным графическим дисплеем, с фиксированной спектральной шириной щели 1,8 нм, управляемый с клавиатуры (или мыши) компьютера. Кроме того, можно еще встретить сравнительно недорогие отечественные спектрофотометры СФ-46 и даже СФ-26, обладающие неплохими оптическими характеристиками и простыми в эксплуатации.
1.3. ФЛЮОРИМЕТРЫ (ЛЮМИНОМЕТРЫ)
Принцип работы флюориметров основан на измерении величины люминесценции — интенсивности излучения некоторых веществ вследствие возбуждения под действием света определенной длины волны, причем длина волны возбуждающего света всегда короче длины волны света излучаемого. Поэтому для возбуждения в люминометрах используют различные источники ультрафиоле-
9
тового излучения, как правило, достаточно мощные. Свет от источника ультрафиолетового излучения с помощью специальных линз фокусируется на кювете с исследуемым веществом и возбуждает флуоресценцию в растворе, которая с помощью специальных линз фокусируется на фотодетектирующем устройстве. Благодаря работе фотодетектора происходит пропорциональное преобразование светового сигнала в электрический.
В общем случае интенсивность флуоресценции пропорциональна концентрации флуоресцирующего вещества. Однако данное утверждение справедливо лишь для достаточно малых концентраций. При повышении концентрации флуоресцирующего вещества наблюдается ряд эффектов (реабсорбции и экранирующий), благодаря которым зависимость интенсивности флуоресценции от концентрации испытывает значительные отклонения от линейности. В аналитических процедурах с использованием флуориметрии, также как в фотометрии, применяют калибровочные графики, построенные на основании флуориметрии эталонных растворов.
Область применения приборов довольно широкая — от биохимических аналитических (витаминов, гормонов, ферментов) до микробиологических (определение концентрации микробных тел, связанных с мечеными флуоресцеином антителами) и иммунологических исследований.
Из представленных на отечественном рынке сравнительно недорогих отечественных флуориметров для лабораторных клинических исследований наиболее пригоден анализатор «Флюорат-02» НПП «ДОЗА» модификаций 02-01 и 02-03, работающий в спектральном диапазоне 200—600 нм. Его рабочие области задаются светофильтрами, позволяющими проводить не только флуоресцентный анализ, но и фотометрический, хемилюминесцентный и анализ фосфоресценции.
1.4. ПЛАМЕННЫЕ ФОТОМЕТРЫ
Применяются при количественном элементном анализе. Принцип работы пламенных фотометров основан на изучении окраски пламени при внесении в пламя горелки исследуемого вещества в виде аэрозоля. Окраска пламени, точнее, изменение окраски, обусловлена излучением, сопровождающим переход атомов распыленного в пламени вещества из более высокого энергетического состояния в более низкое. Молекулы солей металлов, попадая в пламя, вследствие высокой температуры распадаются на отдельные ионы, электроны которых непрерывно переходят из одного энергетического состояния в другое, что сопровождается непрерывным излучением и поглощением света. Минимальная температура, необходимая для атомизации и возбуждения, зависит от природы исследуемого элемента, но довольно мало от состава соединения, в который этот элемент входит. Поэтому возможности метода
10
пламенной фотометрии ограничиваются возможностями создания пламени высокой температуры. При сгорании бытового газа (метан) в воздухе метод позволяет определять содержание лишь легковозбудимых щелочных металлов — лития, калия, натрия. При переходе к высокотемпературному пламени, такому, как водород в кислороде или ацетилен в кислороде, возможности метода значительно расширяются.
Современные приборы для пламенной фотометрии оснащены устройствами дозирования и введения исследуемых растворов в пламя горелки; оптической системой, формирующей луч света, падающий в приемник; электронными усилителями сигнала; блоками индикации или регистрации сигнала; устройствами поджига горелки и др. В некоторых приборах фотоэлектрический сигнал формируется совокупностью устройств таким образом, что его величина становится пропорциональной концентрации исследуемого вещества, а шкала прибора градуирована в единицах концентрации исследуемого вещества.
