Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кондрахин И.П. -> "Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики" -> 3

Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.

Кондрахин И.П., Архипов А.В., Левченко В.И., Таланов Г.А., Фролова Л.А., Новиков В.Э. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики: Справочник. Под редакцией Сайтаниди В.Н. — М.: Колос, 2004. — 520 c.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка): metodvetkllabdia2004.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 < 3 > 4 5 6 7 8 9 .. 246 >> Следующая


T= у ¦ 100.

Во многих случаях аналоговые терминалы снабжены второй шкалой, оцифрованной не в процентах, а в единицах оптической плотности (D). Оптическая плотность с пропусканием связана соотношением

D = -lg (Г).

Разумеется, здесь пропускание выражается не в процентах, а в виде десятичной дроби. С концентрацией поглощающего вещества при условии, что в растворе нет других веществ, поглощающих в той же спектральной области, оптическая плотность связана соотношением

D = КС,

где К — коэффициент пропорциональности, зависящий от размеров кюветы и свойств поглощающего вещества; С — молярная концентрация.

Поэтому для количественного анализа колориметрическим методом (точнее фотометрическим, так как измерения могут проводиться в ультрафиолетовой или ближней инфракрасной областях, где никакой видимой окраски нет) удобнее пользоваться калибровочными графиками, заранее построенными с помощью колори-метроэталонных растворов.

При определении светофильтра для колориметрии окрашенного раствора следует выбирать такую длину волны падающего света, которая соответствует максимальному поглощению пигмента. Можно воспользоваться таблицей 1. При работе с растворами, поглощающими в ультрафиолетовой или инфракрасной областях, данные таблицы 1 непригодны и следует руководствоваться либо готовой методикой, либо предварительным экспериментальным поиском подходящей спектральной области. При этом следует учитывать, что при работе в области длин волн ниже 340 нм обычные стеклянные кюветы непригодны и необходимы кюветы из специальных сортов стекла (увиолевые) или кварцевые.

Наиболее распространены отечественные колориметры КФК-2 — однолучевой, с аналоговым терминалом, дополнительным выходом для подключения цифрового вольтметра и КФК-3, отличающийся от КФК-2 цифровым терминалом, выходом для подключения

7

1. Длины волн спектра и соответствующие им окраски

Длина волн поглощаемого света, нм

Цвет поглощаемого излучения

Дополнительный цвет (наблюдаемый цвет раствора)

400-480 435-480 490-500 500-560 560-580 580-595 595-605 605-730 730-760

Фиолетовый Синий

Сине-зеленый

Зеленый

Желто-зеленый

Желтый

Оранжевый

Красный

Пурпурный

Желто-зеленый

Желтый

Красный

Пурпурный

Фиолетовый

Синий

Зеленовато-синий

Сине-зеленый

Зеленый

ЦПУ и монохроматором вместо набора сменных светофильтров. Оба колориметра работают в диапазоне от 315 до 980 нм. Используют также различные импортные колориметры всех типов.

Спектрофотометрия применяется не только для количественных измерений, но и для задач качественного анализа. Во многих случаях для аналитических целей необходимо установить точное положение максимумов и минимумов в спектре поглощения. В спектрофотометре нужные участки спектра выделяются при помощи поворота специальных стеклянных призм, кварцевых призм, вогнутых зеркал или дифракционных решеток, поэтому можно устанавливать любую длину волны в заданном диапазоне. Многие спектрофотометры оснащены графической регистрацией. В этих случаях предусмотрено плавное автоматическое изменение длины волны. Как правило, такие приборы позволяют полностью автоматически регистрировать спектры поглощения либо на диаграммной ленте, либо на экране монитора компьютера.

Обычно такие приборы либо двухлучевые, либо используют возможности компьютера для введения компенсации на неравномерность поглощения растворителя, находящегося в кювете сравнения. При ручной смене длины волны автоматическая регистрация спектра невозможна, поэтому компенсация на изменение поглощения растворителя при смене длины волны производится также вручную с помощью специальных органов управления. Такие приборы, как правило, однолучевые, а стоимость их намного ниже, чем двухлучевых с автоматической регистрацией спектра.

При «ручной» регистрации спектра или измерении оптической плотности на какой-либо одной длине волны последовательность операций измерения на спектрофотометре не отличается от таковой для колориметра. По кювете сравнения (с чистым растворите-

1.2. СПЕКТРОФОТОМЕТРЫ

8

лем) устанавливают 100 % пропускания шкалы путем изменения чувствительности фотодетектирующей части либо меняя ширину светопропускающей щели. Затем под луч устанавливают кювету с контролируемым образцом и повторяют измерение. Для перемещения кюветы приборы, как правило, оборудуют специальным приспособлением (кареткой).

Важная особенность работы на спектрофотометрах по сравнению с колориметрами — необходимость правильного выбора ширины щели. Шириной щели спектрофотометра определяется ширина выделенного щелью интервала длин волн: чем шире щель, тем шире и спектральный интервал. При слишком широкой щели возможны ошибки за счет прохождения света с длинами волн, соседними с выбранной. В паспорте прибора обычно указаны не только геометрическая ширина щели, но и значения зависимости спектральной ширины щели от геометрической ее ширины при разных длинах волн. В идеальном случае ширина щели не должна превышать 2 нм. Однако это может потребовать слишком узких щелей, при которых интенсивности света может недоставать даже для кюветы сравнения. Также при спектрофотометрии значительные ошибки может вносить мутность объекта вследствие светорассеяния.
Предыдущая << 1 .. 2 < 3 > 4 5 6 7 8 9 .. 246 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed