Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
1.7. РЕФРАКТОМЕТРЫ
Рефрактометры предназначены для определения показателя преломления вещества. В наиболее распространенных среди них (за основу конструкции взяты рефрактометры Аббе и Пульфриха) луч света от зеркала попадает на призму из двух половинок, между которыми помещают слой исследуемого вещества (несколько капель). Поле в окуляре рефрактометра при этом выглядит равномерно освещенным. Поворотом призмы достигается полное внутреннее отражение света от поверхности раздела между нижней половиной призмы и анализируемым веществом, что наблюдается в окуляре появлением темного поля с резко очерченными границами. После этого перекресток нитей в окуляре специальным микрометрическим винтом наводят на границу темного поля, делают отсчет значения и по шкале прибора. В зависимости от типа рефрактометра точность измерения показателя преломления может достигать от 0,0001 до 0,00001.
Рефрактометрический анализ экспериментально довольно прост и широко применяется в технологическом контроле спиртовой и пищевой промышленности для определения содержания сухих веществ в молоке, белков в сыворотке крови при клинических исследованиях, содержания сахара в различных жидкостях. Целесообразно применять его для определения одного какого-либо вещества, показатель преломления которого резко отличается от показателей преломления остальных присутствующих веществ и среды. При проведении анализов по показателю преломления, пользуясь калибровочным графиком, находят содержание определяемого вещества. Некоторые типы промышленных рефрактометров снабжены для удобства работы шкалами, показывающими сразу содержание сахара или сухих веществ.,
13
Часто данные рефрактометрического анализа используют в вете-ринарно-санитарной экспертизе для определения натуральности молока. Метод основан на осаждении белков молока с последующим измерением показателя преломления молочной сыворотки, который зависит от кислотности молока и содержания в нем воды.
Наиболее распространены простые отечественные рефрактометры РЛ-2, РЛ-2М, РПЛ-ЗМ, а также высокоточные рефрактометры-интерферометры ИРФ-454 Б2М, ИРФ-456 «Карат-МТ». Для серийных экспресс-анализов часто применяют погружные рефрактометры.
1.8. АНАЛИЗАТОРЫ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК МОЛОКА
В последнее время в лабораториях молочной промышленности получили распространение специализированные приборы контроля соматических клеток молока: индикатор подсчета соматических клеток молока (ИСКМ-1) и анализатор соматических клеток молока («СОМАТОС»). Принцип их действия основан на кондукто-метрии — измерениях электропроводности молока на постоянном и переменном токе. Оба прибора практически не требуют предварительной подготовки образцов.
1.9. ПРИБОРЫ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Принцип действия физических приборов, используемых в иммунологии, как правило, базируется на изучении физических характеристик, образующихся в результате взаимодействия антигена с иммуноглобулинами (и некоторых других реакций) макромоле-кулярных иммунных комплексов. Основной сильно меняющейся в процессе реакции физической характеристикой среды, в которой происходит образование иммунных комплексов, является ее светорассеивающая способность. Поэтому в современном имму-нохимическом анализе большое распространение получили методы турбидиметрического и нефелометрического анализов. Оба метода позволяют количественно судить о мутности раствора: либо по количеству рассеянного света, либо по количеству прошедшего света; в первом случае говорят о нефелометрии, во втором — о турбидиметрии.
Турбидиметрическим методом анализа (турбидиметрией) называют метод, основанный на измерении интенсивности света, прошедшего через суспензию или эмульсию, т. е. мутную среду. Интенсивность уменьшается вследствие рассеяния света.
Нефелометрическим методом анализа (нефелометрией) называют метод, основанный на измерении интенсивности света, рассеянного мутной средой — суспензией или эмульсией. При отсутствии
14
поглощения интенсивность рассеянного света пропорциональна числу дисперсных частиц.
Нефелометрия — более чувствительный и надежный метод, позволяющий работать с очень низкими концентрациями преципитата. В силу принципа нефелометрии при отсутствии преципитата в растворе на фотодетектор свет от источника вовсе не попадает и достаточно очень небольшого числа светорассеивающих частиц, чтобы получить резкое возрастание сигнала. Поэтому в настоящее время большое распространение получили сканирующие лазерные нефелометры, специализированные для иммунологических целей. Эти приборы позволяют в автоматизированном режиме измерить мутность иммунологической плашки путем последовательного или параллельного «опроса» состояния содержимого всех лунок. «Опросом» и обработкой результатов управляет ПЭВМ. Наличие в качестве источника света лазера в значительной степени упрощает оптическую часть приборов (нет проблем с фокусировкой луча) и резко повышает чувствительность системы вследствие высокой яркости и отсутствия нагревания раствора лучом.
Турбидиметрические измерения требуют гораздо более высокой концентрации преципитата, так чтобы рассеивалось не менее 20 % падающего света, иначе надежность измерений снижается. С другой стороны, для турбидиметрических измерений не требуется специального прибора, пригоден любой колориметр. Турбидиметрические измерения ведут на самой короткой длине волны, позволяемой конкретным прибором.
