Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 - Киршвинк Дж.
ISBN 5-03-001274-5
Скачать (прямая ссылка):
3.2. Световая микроскопия
Брюшко шмеля разрезали сверху по средней линии, вскрывали, оттягивали иголками края разреза, затем фиксировали и проводили цветную реакцию на железо при помощи ферроцианида калия. Как и у Apis (см. Kuterbach et al., 1982), у шмеля наблюдалось интенсивное окрашивание клеточных слоев, окружающих каждый брюшной сегмент. Однако в отличие от Apis у шмеля интенсивно развиты жировые клетки, вследствие чего голубая окраска эноцитов менее заметна. И все же, если удалить слой этих клеток и посмотреть препарат в световом микроскопе, голубое окрашивание становится хорошо различимым. После окрашивания на железо фиксированных и заключенных в гликол-мета-крилат срезов брюшных сегментов выявляются клетки, содержащие железо (рис. 7.1). На срезе на рис. 7.1 под кутикулой видна группа клеток с плотным зернистым материалом, который при просмотре в проходящем свете кажется голубым. При большем увеличении (рис. 7.2) гранулярная природа окрашенного материала становится еще очевиднее; можно заметить также, что окрашены не все клетки. Следует указать, что данный участок был специально выбран для демонстрации позитивного окрашивания клеток и что на других участках срезов окрашенных клеток было меньше. Гранулы распределены внутри клеток, по-видимому, более или менее равномерно, и при данном увеличении не удается заметить их связи с какой-либо определенной структурой.
Рис. 7.1. Микрофотография в световом микроскопе при небольшом увеличении срезов, заключенных в гликол-метакрилат и окрашенных ферроцианидом калия и красителем Кернехтрота. Клетки, содержащие темный гранулярный осадок, при визуальном наблюдении кажутся голубыми, /-кутикула, 2-эноцит, 3-жировая клетка, 4-мышца.
Рис. 7.2. Микрофотография толстого среза в световом микроскопе при большом увеличении. Обратите внимание на гранулярное окрашивание и плотные частицы в вакуолизированных эноцитах; в отличие от цитоплазмы в эноцитах цитоплазма жировых клеток гомогенна. I - эноцит, 2 - жировая клетка.
Среди эноцитов встречаются неокрашенные жировые клетки с гомогенной цитоплазмой. Вместе с тем в цитоплазме эноцитов, содержащих железо, имеются вакуоли. Просматривая срезы, можно составить схему распределения клеток, содержащих железо, в каждом брюшном сегменте и показать, что на вентральной стороне брюшка таких клеток больше, чем на дорсальной. В непосредственной близости от этих клеточных слоев, особенно около вентрально расположенных сегментарных ганглиев, проходят крупные пучки нервных волокон.
3.3. Электронная микроскопия
Брюшные сегменты фиксировали и заключали в гистологическую среду, как это принято в электронной микроскопии. Толстые (1 мкм) срезы окрашивали ферроцианидом калия и получали при этом картину, которая была описана выше. Затем блоки ткани обрезали, оставляя области с наиболее высокой плотностью клеток, содержащих железо, изготавливали тонкие срезы и окрашивали их для электронной микроскопии. На таких срезах видны клетки двух типов (рис. 7.3): клетки с мелкими пузырьками и большими нерегулярными электроноплотными включениями и клетки с крупными пузырьками и более мелкими частицами, обладающими высокой электронной плотностью. На толстых срезах того же материала при просмотре в световой микроскоп цветную реакцию на железо давали только клетки с мелкими плотными частицами и крупными пузырьками. При обычной электронной микро-
Рис. 7.3. Микрофотография жировой клетки и примыкающего к ней эноцита в просвечивающем электронном микроскопе при небольшом увеличении. В этом осмированном и окрашенном срезе плотность цитоплазмы обеих клеток высока. Жировые клетки (/) содержат аморфные плотные гранулы (2), тогда как эноциты (3) содержат мелкие плотные гранулы (указаны стрелками) и крупные вакуоли (4).
скопии цитоплазма в клетках обоих типов выглядит плотной, и при малом увеличении мелкие гранулы железа в ней часто трудно выявить. При большом увеличении гранулы становятся заметнее (рис. 7.4), часто они связаны с мембранами эндоплазматического ретикулума, а в некоторых случаях, по-видимому, окружены мембраной. Частички диаметром около 0,7 мкм часто встречаются I рунцами, образуя электроноплотную массу больших размеров.
Чтобы выявить частицы более отчетливо и провести анализ элементного состава, делали толстые (1500 А) срезы неосмированных, заключенных в эпон кусочков брюшка Bombus. После окраски уранилацетатом и цитратом свинца становились видимыми клеточные детали. На срезе на рис. 7.5 видны края двух соседних клеток: одной (жировая клетка) с большими электроноплотными гранулами и другой (эноцит) с более мелкими и еще более электроноплотными гранулами. Более мелкие гранулы эноцита могут в процессе резки разрушать материал, чего никогда не наблюдается в случае более крупных гранул жировых клеток. Это свидетельствует о том, что гранулы меньшего размера имеют большую плотность и твердость. Их диаметр составляет от 0,2 до 1,0 мкм, они чаще всего имеют шарообразную форму, но могут быть и продолговатыми; нередко они образуют скопления.
Когда срезы не окрашены, клеточные детали не видны (рис. 7.6), правда, мелкие гранулы эноцитов выглядят электроноплотными, как и
