Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
Сохранность клеток зависит не только от выбора подходящей среды. Имеются данные, что способность к длительному выживанию определяется на ранних эта; пах культивирования, причем на длительность выживания клеток оказывают влияние как методы диспергирования, так и условия роста. К тому времени, когда в культуре образуется сплошной слой клеток, увеличить период выживания клеток, уже определенный в период роста, практически невозможно.
ВЫБОР СРЕДЫ
Каталоги многих фирм, выпускающих среды для культивирования клеток, содержат большое разнообразие наименований сред. Однако только в нескольких случаях имеются указания к их применению. Многие среды были специально разработаны для определенных клеточных линий или клеточных типов, йо, как правило, их можно использовать для самых различных культур. Постоянные 'клеточные линии часто приспособлены к росту на определенной среде, и если в ней не содержится компонентов, которые бы отрицательно сказались на результатах предполагаемого исследования, то именно эту среду и следует выбрать для работы. Для посева первичной культуры или выведения новой постоянной клеточной линии выбрать какую-то одну среду из многочисленных существующих сред довольно трудно.
Многие первичные культуры достаточно хорошо растут на простой и дешевой среде, в состав которой входит гидролизат лактальбумина и сыворотка (10%). Использование среды 199 и ее производных позволяет уменьшать концентрацию сыворотки в среде, рост же клеток при этом не нарушается. Превосходной средой для первичных культур и клеточных линий является среда Хэма F-10 с 2—10% сыворотки [73]. Более поздняя модификация этой среды, среда F-12, служит для клонирования клеток. Для культивирования клеточных линий наиболее широко используется среда Игла. Наиболее простой ее вариант, основная среда, пригоден для многих диплоидных культур, хотя количество аминокислот в этой среде иногда может быть лимитирующим фактором [86]. По этой причине часто предпочитают использовать среду с удвоенной концентрацией аминокислот и витаминов [87]. Выпускают также среду Игла с утроенным содержанием аминокислот. Минимальная среда Игла (МЕМ) [42] обычно используется для постоянных клеточных линий, хотя в некоторых случаях количество аргинина и гистидина отзывается слишком высоким. При работе с «капризными» клеточными культурами, а также первичными культурами, культурами лейкоцитов и клеток, взятых из биопсийного материала рекомендуется пользоваться средой Маккоя 5а [88], хотя в последнем случае многие исследователи предпочитают среду RPMI 1640 [89].
Представляется удивительным, как легко клетки млекопитающих сохраняют жизнеспособность и растут на таких разнообразных средах. Вместе с тем иногда трудно адаптировать клетки к росту на близких по составу средах или даже на разных партиях одной и той же среды. Иногда .причина кроется в недостаточно точном описании среды при первой публикации. В некоторых прописях не указывается, какие, гидратированные или безводные, соли были использованы, в какой форме, L жди DL, были добавлены аминокислоты. Таким образом, Можно приготовить две партии одной и той же среды, йь они будут различаться по своей токсичности и другим !®ййствам. Следовательно, при описании сложных по со-ИШву сред чрезвычайно важно очень точно указывать
все свойства каждого компонента и указывать Источники их получения. Только при соблюдении этих условий можно добиться стандартизации и только тогда можно будет сравнивать результаты, полученные в различных лабораториях.
ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Gomori G., Ргос. Soc. exp. Biol. Mrd., 62, 33 (1946).
2. Swim H. E., Parker R. F„ Science, N. Y„ 122, 466 (1955).
3. Martin G. М., Proc. Soc. exp. Biol. Med., 116, 167 (1964).
4. Shipman C. Jr., Proc. Soc. exp. Biol. Med., 130, 305 (1969).
5. Leibovitz A., Am. J. Hyg., 78, 173 (1963).
6. Phillips H. J., Andrews R. V., Expl Cell Res., 16, 678 (1959).
7. Eagle H., J. biol. Chem., 214, 839 (1955).
8. Chang R. S., J. exp. Med., 113, 405 (1961).
9. Lockart R. Z. Jr., Eagle H., Science, N. Y., 129, 252 (1959).
ilO. Best N. H., Mills S., Leach К. K-, Durham N. N., Leach F. R., Expl Cell Res., 31, 13 (1963).
11. Schimke R. Т., Barile M. F„ J. Bact., 86, 195 (1963).
12. Moskowitz М., Kelker N. E„ Science, N. Y., 141, 647 (1963).
13. Tomkins G. A., Ferguson J., Aust. J. exp. Biol. med. Sci., 43, 743
(1965).
14. Gross G. F., Goodman M. R., Shaw E. J., Aust. J. exr. Biol. med. Sci., 45, 201 (1967).
15. Parker R. C., Methods of Tissue Culture, 3rd edn. Pitman Medical, London, 1961.
16. Paul J. Cell and Tissue Culture, 4th edn. Livingstone, Edinburgh, 1970.
17. Penso G., Balducci D., Tissue Cultures in Biological Research, Elsevier, Amsterdam, 1963.
18. Hayflick L., Moorhead P. S., Expl Cell Res., 25, 585 (1961).
19. Swim H. E., Parker R. F., J. Lab. clin. Med., 52, 309 (1958).
20. Hayflick L., Jacobs P., Perkins F., Nature, Lond., 204, 146 (1964).
