Новые методы культуры животных тканей - Фридлянской И.И.
Скачать (прямая ссылка):
Мембранные фильтры устойчйвы к температуре порядка 200 °С, поэтому перед использованием для стерилизации их можно автоклавировать. Способность мембранных фильтров выдерживать высокие давления, а также их чрезвычайно высокая пористость (отсюда низкая сопротивляемость движению жидкости) дают
возможное ъ достичь высокой скорости фильтрования* Фильтрование через мембранный фильтр занимает меньше времени, чем через глубинный фильтр той же площади. В табл. 2.2 приведены скорости фильтрования воды через мембранные фильтры; если сравнить их со скоростью фильтрования через глубинные фильтры (табл. 2.1), то нетрудно заметить, что при одинаковых условиях скорость фильтрования через ситовые фильтры почти в 40 раз выше, чем через глубинные фильтры. Для того чтобы отфильтровать через глубинный фильтр очень вязкий раствор, требуется около Двух дней; этот же раствор через мембранный фильтр может быть отфильтрован за несколько часов, причем и размер требуемого мембранного фильтра также значительно меньше. При работе с мембранными фильтрами не возникает проблем, связанных с зарастанием фильтра, потому что через поры фильтров, предназначенных для стерилизации, микроорганизмы не проходят.
При фильтровании сред для культивирования «капризных» клеток лучше использовать максимально гидрофобные MF-фильтры, которые поставляет фирма «Миллипор» по специальному заказу.
КОНТРОЛЬ ЗА КАЧЕСТВОМ МЕМБРАННЫХ ФИЛЬТРОВ
Для того чтобы определить, соответствуют ли мил-липоровые фильтры требованиям стандарта, их подвергают тщательной проверке. Ниже перечислены специфические тесты, выполняемые систематически:
1. Определение максимального размера пор (проба на образование пузырьков). Этот чрезвычайно важный тест может быть дополнительно осуществлен в лабораторных условиях, поэтому техника проведения пробы на образование пузырьков описана далее подробно.
2. Определение скорости фильтрования.
3. Определение размеров пор с помощью интрузии ртути.
4. Определение бактериального роста — сравнивают бактерии, которые культивируют на поверхности фильтра и на агаре, при этом показателями служат число выживших бактериальных клеток, характер образования колоний и продукция пигмента.
5. Тест на стерильность фильтрования. Например, чтобы определить пригодность фильтров GS (0,22 мкм) для стерилизации, через них пропускают суспензию, содержащую клетки различных видов Pseudomonas (минимальный размер этих клеток примерно 0,3 мкм). Параллельно такую же суспензию пропускают через фильтр НА (0,45 мкм). Суспензии фильтруют в стерильные колбы и инкубируют затем в течение 15 дней при температуре 37 X. НА-фильтрат помутнеет, что указывает на рост Pseudomonas, а GS-фильтрат должен остаться прозрачным. В противном случае вся партия GS-фильтров не пригодна к использованию.
В специальном исследовании [4], проведенном для определения эффективности стерилизации фильтрованием, было установлено, что единственной системой, надежно обеспечивающей стерильность фильтратов, является система, включающая миллипоровые фильтры и соответствующую аппаратуру. Каждая фильтрующая система оценивалась при пропускании через нее густой бактериальной суспензии Serratia marcescens. Параллельно оценивались три другие фильтрующие среды: диатомовая земля (кизельгур), спеченное стекло и асбест. Таким образом, можно видеть, что выбор фильтра для стерилизации фильтрованием имеет первостепенное значение. В настоящее время считается, что только мембранные миллипоровые фильтры гарантируют стерильность во всех условиях; однако благодаря их низкой поглотительной способности для создания надежной и экономичной системы фильтрования часто бывает необходимо использовать также и глубинный предфильтр. В табл. 2.3 приведены данные по химической устойчивости стандартных миллипоровых фильтров MF. Можно видеть, что нйзкомолекулярные спирты, кетоны и некоторые другие растворители повреждают фильтры, и поэтому они he пригодны для стерилизации биологического материала, в котором присутствуют эти растворители. Фирма «Миллипор» предлагает особые фильтры (Solvinert), которые устойчивы к действию почти всех известных растворителей и других химических агентов (табл. 2.3). Диаметр пор фильтров SoJvinert составляет приблизительно 0,25 мкм.
Таблица 2.3
Химическая совместимость миллипоровых фильтров
(статические условия)1
Химические соединения Тип фильтра
MF Solvinert
Углеводороды
Гекзсан I I
Петролейный эфир I I
Пентан I I
Бензол I I
Толуол I I
Ксилол I I
Галоидзамещенные углеводороды
Мешлхлороформ I I
Хлороформ I I
Четыреххлористый углерод I I
