Биологические мембраны - Финдлея Дж.Б.
ISBN 5-03-001317-2
Скачать (прямая ссылка):
чувствительность к облучению резко возрастает по мере повышения
температуры. В этих условиях обычно принято строить калибровочную кривую
для молекулярной массы ряда известных белков в зависимости от их
чувствительности к облучению. Данные для новых белков можно затем
непосредственно сравнивать с этими стандартами. Такой подход хорошо
оправдал себя в случае мономерных мембранных белков [179, 180] и оказался
вполне удовлетворительным для олигомерных систем [181, 182]. Обычно
полученные молекулярные массы отражают нативный молекулярный состав, хотя
он не всегда отвечает размерам минимальной функциональной структуры. В
некоторых случаях были получены размеры мишени, которые соответствуют
только части изучаемого молекулярного комплекса [183]. По-видимому, это
связано с отсутствием "общения" между субъединицами. Поэтому важно наряду
с радиационной инактивацией использовать и другие методы исследования.
Радиационная инактивация может оказаться очень информативной при изучении
индуцированной ассоциации, возникающей, например, при сопряжении
рецептора с аденилатциклазой в присутствии гормона. В этом случае,
оценивая молекулярную массу, можно отличить несопряженную цнклазную
систему от сопряженного комплекса, формирующегося в присутствии гормона
[184]. Однако при этом еще более важно, чем раньше, подкрепить эти выводы
независимыми исследованиями, поскольку в случае таких сложных ансамблей,
как аденилатцик-лазная система, вероятность вариабельности в условиях
постоянного равновесия необычайно велика [185]. Там, где это возможно, в
конце эксперимента следует проводить электрофорез в ПААГ в присутствии
ДСН, чтобы оценить, какое действие оказала радиация на мембранные белки.
Выделение и модификация мембранных белков
303
8. Заключение
Исследование интегральных мембранных белков все еще остается трудной
задачей, требующей оригинальных подходов и нетривиальных решений; тем не
менее каждый год появляются все новые сообщения о совершенствовании
имеющейся методической базы. По-видимому, особого внимания здесь
заслуживает разработка аппаратуры и технологии приготовления сорбентов
для выделения гидрофобных белков и пептидов. В сочетании с современными
эффективными методами модификации белков и определения их аминокислотной
последовательности усовершенствование методов выделения позволяет
надеяться на быстрый прогресс в познании химического строения белков, их
молекулярной организации и локализации в мембранах.
Литература
1. Marchesi V. Т., Steers Е" Jr. (1968). Science, 159, 203.
2. Fairbanks G., Steck T. L" Wallach D. F. H. (1971). Biochemistry, 10,
2606.
3. Tanner M. J. A., Gray W. R. (1971). Biochem. J., 125, 1109.
4. Steck T. L. (1972). Biochim. Biophys. Acta, 225, 553.
5. Carter J. R., Jr. (1973). Biochemistry, 12, 171.
6. Sehiechl hi. (1973). Biochim. Biophys. Acta, 307, 65.
7. Steck T. L" Yu J. (1973). J. Supramol. Struct., 1, 221.
8. James G. T. (1978). Anal. Biochem., 86, 574.
9. Bordier C. (1981). J. Biol. Chem., 256, 1604.
10. Clemetson K. J., Bienz D., Zahno M.-L., Luscher E. F. (1984).
Biochim. Biophys. Acta, 778, 463.
11. Mahar P. A., Singer S. J. (1985). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82,
958.
12. Pryde J. G. (1986). Trends Biochem. Sci., 11, 160.
13. Folch J., Lees М., Slone-Stanley G. (1957). J. Biol. Chem., 226,
497.
14. DeRobertis E. (1975). Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol., 73,
11.
15. Altendorf K., Lukas М., Lohl B., Muller C., Sandermann H. (1977). J.
Supramol. Struct., 6, 229.
16. Phizackerly P. J. R., Town M" Newman G. E. (1979). Biochem. J., 183,
731. '
17. Altendorf K. (1977). FEBS Lett., 73, 271.
18. DeRobertis E., Fiszerde Plazas S., Llorente de Carlin C" Aguilar J.,
Schlieper P. (1978). Adv. Pharmacol. Ther., 1, 235.
19. Boyan-Salyers B" Vogel J., Riggan L., Summers F., Howell R. (1978),
Metab. Bone Dis. Rel. Res., 1, 143.
20. Criado H., Aquilar J., DeRobertis E. (1980). Anal. Biochem., 103,
289.
21. Gerber G. E" Anderegg R. J., Herlihy W. C., Gray C. P., Biemann K.,
Khorana H. G. (1979). Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 76, 227.
22. Findlay J. В. C" Brett М., Pappin D. J. C. (1981). Nature, 293, 314.
23. Brett М., Findlay J. В. C. (1983). Biochem. J., 211, 661.
24. Pappin D. J. C" Findlay J. В. C. (1984). Biochem. J., 217, 605.
25. Sigel E" Stephenson F. A., Mamalaki C., Barnard E. A. (1983). J.
Biol. Chem., 258, 6965.
26. Fillingame R. (1976). J. Biol. Chem., 251, 6630.
27. Siebald W" Wachter E. (1980). FEBS Lett., 122, 307.
28. Welling G. W., Groen G., Welling-Webster S. (1983). J. Chromatogr.,
266, 629.
304
Глава 6
29. Lundahl P., Greijer E" Lindblom H., Fagerstam L. G. (1984). J.
Chroma-togr., 297, 129.
30. McGregor J. L" Clezardin P. L., Manach М., Gronlund S., Dechavanne M.
(1985). J. Chromatogr., 326, 179.
31. Engel IT. D. S., Schagger H., Von Jagow G. (1980). Biochim. Biophys.
Acta, 592, 211.
32. Aton B. R., Litman B. J., Jackson M. L. (1984). Biochemistry, 23,
1737.
