Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
85
мышей В16, показали, что клетки из первичной опухоли отличаются друг от друга способностью к избирательному метастазированию в легкие (Fidler, Kripke, 1977).
С помощью повторных пассажей клеток меланомы, полученных из метастатических узлов легких сингенных мышей С57 BL/6, in vitro и in vivo были выделены различные линии с высокой и низкой способностью метастазировать в легкие. Эти клетки, обозначенные соответственно как F10- и Fj-сублинии, сохраняют свои свойства в культуре, и ими стали широко пользоваться как моделью для изучения роли взаимодействия клеточных поверхностей в органоспецифичности метастазирования, В настоящее время имеется несколько дополнительных систем этого типа (Brunson, Nicolson, 1978; Nicolson et al., 1978; Talmadge et al., 1979).
Проведено сравнительное изучение сиалосодержащих гликопептидов клеточной поверхности, солидных меланом, полученных при перевивке клеток ?г и F10 меланомы В16 и нормальных тканей мышей (Warren et al., 1975). По сравнению с нормальными тканями опухолевые клетки были богаче сиалированными фукозосодержащими гликопептидами. Хроматограммы гликопептидов, получеипые при гель-фильтрации материала, взятого из меланом, растущих in vivo, более сложные, чем полученные из материала, взятого из меланом, растущих в культуре in vitro, но клеточные сублинии F10 и Fx имели идентичный гликопептидный профиль, несмотря на их различную способность к метастазированию.
Различия доступности остатков сиаловых кислот поверхности клеток F10 и F2 описаны Yogeeswaran и соавт. (1978). Когда F10- и Fr клетки были помечены введенным радиоактивным глюкозамином и через 48 ч обработаны нейраминидазой, полученная из интактных клеток F10 радиоактивность была на 80 % больше, чем из клеток ?г. В этих экспериментах превращение глюкозамина в сиаловые кислоты было одинаковым в обеих клеточных линиях. Полученные результаты согласуются с результатами ранее проведенных исследований сублиний меланомы В16 в лаборатории Bosmann (Bosmann et al., 1973).
Различия содержания сиаловых кислот в клетках F10 и в большей степени обусловлены сиаловыми остатками ганглиозидов, чем гликопротеидов, что было показано путем включения радиоактивности в клеточные гликолипиды и гликопротеиды с помощью галак-тозоксидазы и меченого боргидрида после обработки нейраминидазой — непрямого галактозоксидазного метода (Gahmberg, Hakomo-ri, 1973; Steck, 1974; Juliano, Behar-Bannelier, 1975). Кроме того, количественные различия содержания четырех сиалогалактонротеи-дов, полученных из меченных непрямым галактозоксидазным методом клеток Fa и F10, были обнаружены при анализе результатов электрофореза в ДСП-полиакриламидном геле. Несколько этих методик было использовано при изучении взаимоотношения сиалирования поверхности клеток и частотой метастазов в легкие опухолей, полученных с помощью трансформации вирусом клеток линии ЗТЗ BALB/c (Yogesswaran et al., 1979). Первичные опухоли росли до одинаковых
86
размеров у сингенных мышей, а процент метастазов в легкие измерялся после удаления первичной опухоли. Процент сиалирования поверхности, установленный непрямым галактозоксидазным методом, имеет значительную положительную корреляцию с частотой метаста-зирования в легкие in vivo. От 44 до 89 % экспонированных на всей поверхности клеток остатков галактозы и (или) N-ацетилгалактоза-мина были сиалированы в высоко или обычно метастазирующих линиях клеток и только 11—30 % были сиалированы в мало или не-метастазирующих линиях. Показано увеличение количества и разнообразия сиалогалактопротеидов в ДСН-полиакриламидном геле для линий, обладающих высокой способностью к метастазированию. Процент глюкозаминмеченой нейраминидазозависимой радиоактивности был также использован как независимый показатель относительных различий при экспонировании групп сиаловых кислот. Результаты этих анализов были не так определенны, как те, которые были получены с помощью непрямого галактозоксидазного метода введения метки.
Возможно, что расхождения результатов отражают различия превращения глюкозамина в сиаловые кислоты, наблюдаемые у разных клеточных линий.
Непрямой галактозоксидазный метод включения метки в поверхность является высокочувствительным методом для определения изменений сиалирования, которые не выявляются другими методами анализа, например окраской перйодатшиффовым реактивом или определением количества сиаловых кислот в клеточной мембране. В общем допускается, что увеличение меченых галактозил- или N-аце-тилгалактозаминил-остатков после обработки клеток нейраминнда-зой отражает наличие незамаскированных сахаров, так как при этом удаляются терминальные остатки сиаловых кислот. В некоторых случаях сиаловые кислоты, освобожденные нейраминидазой, могут оставаться на отдельных углеводных цепях, которые полностью блокируют ферментативные включения метки в терминальные галактозил- или N-ацетилгалактозаминил-остатки на других олиго-сахаридных цепях. Возможность ошибок нарастает, когда метод непрямого включения метки используется для идентификации сиалогалактопротеидов на полиакриламидном геле. Структура сиало-гликопротеидов может быть изменена отрывом сиаловых кислот, который происходит в их аномальной миграции при электрофорезе на ДСН-полиакриламидном геле (Gahmberg, Andersson, 1977). Альтернативный метод существует для избирательного включения метки в остатки сиаловых кислот и заключается в окислении метаперйодатом натрия сиаловых кислот в области между С-7 и С-8 или С-8 и С 9 и последующим восстановлением полученных альдегидов NaB3H4 — меченным тритием боргидридом натрия (Gahmberg, Andersson, 1977). Этот метод может быть использован для независимого подтверждения результатов, полученных с помощью непрямого галактозоксидазного метода включения метки.
