Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Включение радиоактивной метки в гликопротеиды и гликолипиды поверхности стало популярным инструментом для анализа компп
87
нентов клеточной поверхности и широко используется для исследования изменений, происходящих в мембранах трансформированных клеток. Большинство исследований допускает, что ферментативное включение радиоактивной метки ограничивается только молекулами клеточной поверхности, так как ферменты настолько велики, что не пересекают барьер мембраны. Потенциально серьезной проблемой может стать то обстоятельство, что поврежденные или погибшие клетки, присутствующие при включении метки в клетку, загрязняют поверхность клеток внутриклеточными гликопротеидами и гликолипидами, которые также могут метиться. При включении меток в компоненты поверхности нельзя различить мембраносвязанные и адсорбированные сывороточные белки. Различия связывания сывороточных компонентов в поверхностно трансформированных и в не-трансформированных клетках могут приводить к артефактам в наборах меченых гликопептидов (Pearlstein, 1977). Отличный обзор, посвященный артефактам, связанным с несколькими распространенными методами включения метки в клеточную поверхность, написан Juliano, Behar-Bannelier (1975).
Качественные различия наборов меченных Ш1 поверхностных белков, полученных в гелях, были обнаружены в клетках ЗТЗ BALB/C и в их метастазирующих вариантах (Walborg, 1978). Подобному анализу были подвергнуты лимфосаркома хомячка, метаста-зирующая в печень, легочная карцинома Люиса (Lewis), дающая метастазы в легкие. Наборы радиойодированных гликопротеидов поверхности, полученные при электрофорезе в геле из первичных и вторичных опухолей, были качественно подобны и не отражали специфичные для опухолей устойчивые наборы гликопротеидов в органах (Cuy et al., 1979).
Сравнивали неметастазирующие и метастазирующие аденокарциномы молочной железы крыс друг с другом и с нормальной молочной железой с целью выявления различий содержания сиаловых кислот в мембранах и наборах сиалогликопротеидов в ДСН-поли-акриламидном геле (Carraway et al., 1978). Содержание сиаловых кислот и структура сиалопротеидов в обеих опухолях были подобны. Три больших класса PAS-окрашиваемых гликопротеидов были обнаружены в мембранах нормальной молочной железы. Мембраны опухолей содержат уменьшенное количество гликопротеидов, в частности, с предполагаемой молекулярной массой 110 кД и со сверхнизкой молекулярной массой приблизительно 70 кД (Shin et al.,
1975). Из солидной метастазирующей опухоли были получены две асцитные сублииии. Несмотря на значительные различия свойств клеточной поверхности и содержания основных сиалогликопротеидов, эти опухоли имели одинаковую скорость роста, скорость гибели и способность к метастазированию in vivo (Carraway et al., 1978).
В настоящее время роль сиаловых кислот поверхности клеток в метастазировании опухолей не ясна (Weiss, 1967). В нескольких работах было найдено, что характер распределения метастазирова-ния клеток по органам можно модифицировать обработкой нейрами-пидазой (Sinha, Goldnberg, 1974; Weiss et alM 1974). Другие свойст-
88
ва малигнизированных клеток, включая иммуногенность, могут быть изменены с помощью специфических сиалогликопротеидов (Godington, 1978) или общего содержания сиаловых кислот на клеточной поверхности (Weiss, 1967). В нормальных клетках также удаление или химическая модификация остатков сиаловых кислот поверхности взаимосвязаны с тканеспецифической адгезией (Caffe-rata et al, 1979) и способностью к «самосборке» (Woodruff, Gesner, 1969).
С помощью некоторых методов стало возможным исследование взаимосвязи изменений сиалоконъюгатов на клеточной поверхности и их метастазирования. Такая возможность появилась благодаря отбору вариантов опухолевых клеток с дефектами гликозилирования (Gottlieb et al., 1975; Meager et al., 1975; Stanley et al., 1975; 1975a;
1977), измененной иммунореактивностью (Fidler et al., 1976; Talmad-ge et al., 1979), и адгезией (Nicolson Winkelhake, 1975; Edwards et al., 1976; Pouyssegur et al., 1976; Juliano, 1978). Способность к мета-стазированию может быть изменена также фармакологически, как это было недавно показано в экспериментах с меланомой В—16 (Stringfellow, Fitzpatrick, 1979). В будущем, возможно, идентифицируют и охарактеризуют гликолизированную молекулу, которая функционально включается в один или более аспектов метастазирования опухолей.
3.2.2. Специфические сиаломуцины опухолей
3.2.2.L Гликопротеид Студдарта-Прайса
Stoddart и Price сообщили об изменениях гликозилирования в кислых гликопротеидах мембран. Изменения были связаны с появлением аномальных белков в плазматических мембранах клеток в предопухолевой ткани и опухолях (Price, Stoddart, 1976; Stoddart, 1979). Растворимые в тритоне гликопротеиды плазматических мембран нормальных эмбриональных тканей крысы и человека, а также печени, легких, селезенки, почек половозрелых крыс исследовали с помощью изоэлектрического фокусирования в полиакриламидном геле и сравнивали с таковыми спонтанных и индуцированных химическими канцерогенами гепатом крыс и их метастазов, карцином молочных желез, эпителиом, фибросарком, аденокарцином кишечника, бронхокарцином человека, лимфосарком свиней, лейкемий мышей и предопухолевых тканей, индуцированных канцерогенами. Кислые гликопротеиды с pi, приблизительно равным 4, были найдены в пределах 1—6 % общего белка, окрашенного кумасси голубым, плазматических мембран клеток опухолей и предопухолевых тканей, но они отсутствовали в плазматических мембранах клеток немалигни-зированных тканей. Во внутренних мембранах клеток нормальных тканей было обнаружено содержание меньшего количества более кислых белков с pi приблизительно 3,8. Два вида гликопротеидов одновременно перемещались в ДСН-полиакриламидном градиентном геле и после обработки нейраминидазой превращались в один вид с р!
