Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Так как продукт гена src — фосфопротеин с мол. м. 60 кД, действующий как протеинкиназа, предложили считать, что отклоняющееся от нормы фосфорилирование клеточных белков белком 60 кД может объяснить онкогенез, индуцированный ASV (Levinson et al., 1978). Однако взаимосвязь продукта гена src с туморогенезом остается неясной. Как показано в исследовании Poste, Food, 1979, ts ASV (ts-мутанты вируса ASV по гену src) вызывают температурозависимую экспрессию многих параметров трансформации in vitro. Однако эти параметры могут быть функционально не связаны со свойством туморогенности. Особый интерес представляют наблюдения, что
1 В настоящее время известно 17 онкогенов, ответственных за злокачественную трансформацию клеток (примеч. переводчика).
186
ts ASV может вызывать опухоли при непермиссивной температуре у цыплят (Becker et al., 1977; Purchase et al., 1977), у которых нормальная температура тела составляет 42 °С. В дополнение, клетки, трансформированные ts ASV, могут формировать опухоли на хорио-наллантоисной оболочке (ХАО) эмбрионов кур. Как при пермиссив-ной, так и при непермиссивной температуре (Poste, Flood, 1979) температурочувствительный вирус выделялся из опухолей ХАО, предотвращая возможность рекомбинации с эндогенными згс-после-довательностями. Это дает основание предполагать, что многие температурозависимые свойства клеток, трансформированных in vitro ts ASV, не связаны с туморогенностью in vivo. Это не исключает, однако, то, что некоторые факторы окружения ХАО позволяют ts-мутантному гену ASV функционировать так, как если бы он был в пермиссивном окружении, т. е. продукт гена src, продуцируемый в ХАО, далее может и не повреждаться.
Особенно интересен тот факт, что дефектные по трансформации саркоматозные вирусы птицы с частичными (но не полными) деле-циями в гене src могут вызывать опухоли, когда вводятся в организм птиц (Hanafusa, 1977; Wang et al., 1979). Саркоматозные вирусы, выделенные из этих опухолей, вновь приобретали утраченную часть гена src, вероятно, за счет клеточных последовательностей (Ilalpern et al., 1979; Hanafusa et al., 1977; Robins, Duesberg, 1979; Vignier et alM 1979; Wang et al., 1978, 1979).
Физиологическая роль клеточных src-последовательностей и продуктов гена (Collett et al., 1979а, b) не известна, но изучение ts-мутантов ASV указывает, что продукт гена src может нарушать диф-ференцировку клеток in vitro (Moss et al., 1979). Возможно, это ока* зывает промоторное влияние на ген src (Bissel et al., 1979).
Остролейкозные вирусы птиц способны трансформировать фибро-бласты in vitro (Royer-Pokora et al., 1978) и in vivo (Graf et al.,
1980), однако они не обладают нуклеотидными последовательностями, гомологичными гену src птичьего саркоматозного вируса (Graf, Beug,
1978). Их генетическая информация адекватна той, которую содержали уникальные трансформирующие последовательности длиной по крайней мере, 1500 нуклеотидов. Два прототипа острых лейкоз-ных вирусов МС29 и МН2 имеют общие нуклеотидные последовательности, предположительно являющиеся эквивалентом гена src остро-лейкозных вирусов (Duesberg, Vogt, 1979).
6.4. ФАКТОРЫ ИНИЦИАЦИИ, СЕЛЕКЦИИ И ОНКОГЕНЕЗА ТРАНСФОРМАНТОВ
Противоречивые результаты, полученные многими исследователями при изучении вирусной трансформации, могут быть объяснены некоторыми незамеченными и игнорируемыми различиями система использованных исследователями.
187
6.4.1. Выбор вирусов и клеток
6ЛЛЛ. Вирусы
Необходимо рассмотреть ключевой вопрос, являются ли такими же, как и другие изоляты того же вируса и как первоначальные его изоляты, многие опухолеродные вирусы, которые сейчас изучаются в большинстве лабораторий. Такие свойства вируса, как рост клеточных культур до высоких титров в условиях быстрого размножения и образование легко изолируемых, видимых бляшек in vitro,— пара из многих свойств, отобранных исследователями, для облегчения изучения вируса. Однако необходимо учесть, что вирусы дикого типа, отобранные на основании этой пары свойств, могут быть вариантом вирусной популяции, в то время как неизолированные ви-рионы — действительно дикий тип.
Следовательно, историю вирусного изолята важно рассматривать как историю клеточных культур, использованных для размножения вируса, когда учитывается биологическая активность вируса как инфекционного агента. Небрежное отношение к истории вируса может повлиять на молекулярную биологию вируса. Примером, почему исследователи должны осознанно вникать в историю вируса, может служить судьба Huie-вируса, в частности Adl2 — наиболее используемого его штамма. Этот штамм был первоначально изолирован и пассировался в течение неизвестного промежутка времени в клетках почек эмбриона человека, вслед за этим он прошел неизвестное число пассажей в клетках, почек макак резус, затем 12 или более пассажей в клетках КВ и HeLa (описание в «NIAID Catalogue of Research Reagents, 1978—1980»). Так как репликация Adl2 могла быть лимитирована в клетках обезьяны в отсутствие SV40,, вероятно, что культуры содержали SV40. С тех пор как гибридный вирус Adl2 — SV40 (с увеличенной онкогенностью) легко генерировался в течение совместного пассирования вирусов в клетках обезьяны (Tooze, 1973), небольшое количество информации SV40 (или клеток обезьяны) могло быть приобретено Adl2-nrraMMOM Huie-вируса в течение пассирования клеток обезьян. Однако общепринятые методы анализа ДНК и определения последовательностей не использовались для проверки этой возможности или для сравнения этого штамма с другими свежеизолированными штаммами Adl2. Хотя предполагать, что этот штамм свободен от экзогенной генетической информации и доказана его идентичность другим изолятам Adl2, можно до тех пор, пока будут проведены необходимые эксперименты.
