Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Трансфекция фрагментами ДНК, полученными с помощью рестрикционных эндонуклеаз, продемонстрировала, что ранние, а не
182
поздние, гены паповавирусов и аденовирусов могут трансформировать непермиссивные клетки (Abrahams et al., 1975; Graham et al., 1974; Graham, 1977; Sawada et al., 1979). Ранние и поздние гены лаповавируса могут отдельно поддерживать свою биологически активную форму в некоторых пермиссивных клеточных линиях (Moyer et al., 1978), но ранние гены необходимы для стабильной трансформации первичных культур клеток (Moyer et al., 1981d). Рестрикционные фрагменты включают участки между 4 и 20 % левого генома аденовирусов и могут фенотипически трансформировать клетки in vitro (Graham, 1977). Клетки, трансфецированные меньшими фрагментами, обладают промежуточным трансформированным фенотипом (см. Shiroki et al., 1979, и ссылки здесь же). Эта ранняя область может кодировать трансформированные белки аденовируса (Ledinko et al., 1979).
«Трансформированные белки» герпесвируса остается определить. Camacho, Spear (1978) показали, что специфический фрагмент вируса герпеса простого может трансформировать клетки хомячка, экспрессирующие несколько фенотипов, ассоциированных с онкогенной трансформацией. Интересно, что продукты гена, кодируемые этим фрагментом генома, не принадлежат к самому раннему кинетическому классу вирусных белков в отличие от других ДНК-co держащих опухолеродных вирусов. Хотя трансформированные лимфобластные клеточные линии, продуцирующие и непродуцирующие вирус EBV, экспрессируют EBV-детерминированный ядерный антиген EBNA (Reedman, Klein, 1973), роль этого антигена в трансформации, если она существует, остается выяснить.
Исследования ts и делеционных мутантов аденовируса и папо-вавируса указывают, что вирусные «Т-(опухолевые) антигены», которые в иммунофлюоресцентной пробе видны в ядре инфицированных и трансформированных клеток, вовлечены в трансформацию (Weil, 1978). Однако ссылка на то, что Т-антигены являются белками, трансформирующими клетки, возможно, слишком большое упрощение. Принимая во внимание сложность роли антигенов в трансформации, мы рассмотрим детально некоторые аспекты трансформирующих белков одного из ДНК-содержащих опухолеродных вирусов (паповавируса обезьяны — SV40). Два известных генных продукта вируса SV40 экспрессированы в раннее время после продуктивной инфекции или в трансформированных непермиссивных клетках. Большой опухолевый Т-антиген, который является продуктом гена A-вируса SV40, имеет молекулярную массу около 94 кД. Тогда как меньший Т-антиген с молекулярной массой 17 кД разделяет концевые последовательности и антигенные детерминанты с Т-антигеном. Оба антигена могут быть иммунопреципитированы из инфицированных и трансформированных клеток антителами животных-опухоле-носителей.
Существует достаточно доказательств того, что в онкогенных па-повавирусах Т(1)-антиген(ы) является трансформирующим белком (и), который обладает некоторыми определенными функциями в трансформированных и продуктивно инфицированных клетках (Weil,
183
4978). Т-антиген может следующее: запустить начало синтеза клеточной ДНК; инициировать репликацию вирусной ДНК; способствовать экспрессии поздних генов вируса SV40; регулировать его собственную транскрипцию; обеспечить функцию помощника для развития аденовирусов человека в клетках обезьян; вовлекаться в инициацию и поддержание трансформированного фенотипа. Как Т-ан-тигены регулируют эти разнообразные физиологические процессы^ неизвестно, однако активность АТФазы и других энзимов ассоциируется с Т-антигенами (см. Giacherio, Hoger, 1979, и ссылки здесь же). В дополнение, Т-антигены и(или) ассоциированные с ними белки хозяина отождествляют с поверхностными клеточными белками^ вовлеченными в специфическую опухолевую трансплантационную устойчивость (Chang et al., 1979а; Coggin, 1979; Coggin, Ambrose^ 1979; Lin et al., 1977; Schmidt-Ulrich, Wallach, 1978).
Продукты вирусных генов определяли обычными иммунологическими методами. Они включают иммунофлюоресценцию (с ее помощью Т-антигены обнаруживаются в ядрах клеток), комплемент-фиксацию и иммунопреципитацию меченными радиоактивными изотопами клеточными белками. Сыворотка и асцитическая жидкость, полученные от животных-опухоленосителей, являются обычными источниками антител к опухолевым вирус-специфическим антигенам. Специфичность этих антител может варьировать, а результаты комбинированных иммунологического и биохимического анализов показали, что некоторые белки, «специфически» иммунопреципитированные сывороткой, полученной от животных с вирус-индуцированными опухолями, вероятно, являются продуктами клеточных генов, которые ассоциируются с продуктами ранних вирусных генов (Chang et al., 19796; Linzer, Levine, 1979; Gang et al., 1979). Хотя роль, еслц она существует, этих клеточных белков хозяина в трансформации остается по-прежнему неизвестной, эти наблюдения натолкнули на спекулятивные предположения, что сниженная способность некоторых мутантов SV40 трансформировать клетки (Bouck et al., 1978; Sleign et al., 1978), возможно, не результат отсутствия вирусного антигена, но может им быть в связи с наблюдаемым сопутствующим уменьшением ассоциированных клеточных белков хозяина (Melero et al., 1979, 1980; Gang et al., 1979), которые могут в конечном счете определить судьбу клетки в отношении ее трансформации вирусом.
