Витамины - Девятин В.А.
Скачать (прямая ссылка):
С е*
О.СЗ ^
d2 Эргостерол 115-117 + 103 265 40000 0,025 1---3 Кальци
(алко ферол
голь)
Холестерол 82---83 +83,3 265 40000 0,025 100 Неокаль
(ацетон) циферол
°4 22-дигидро- 107---108 +89,3 265 20 000 0,05--- 20
эргостерол (ацетон) 30 ООО 0,038
7-дегидросито- - --- --- 1 300 не уста менее
стерол новлен 100
D. --- - 20 50
D , Провитамин --- --- --- 40 000 не уста 100
мышц новлен
В последнее время получено большое количество различных производных и изомеров кальциферола, но они в подавляющем большинстве не обладают антирахитической активностью. Биологически активными следует признать лишь витамины D2, Ds, D4h D5f различающиеся по боковым цепям и по положению в них двойной связи. Различия эти сказываются и на их физико-химических константах.
Сравнительная характеристика известных нам витаминов D приведена в табл. 32.
МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Химическое определение витамина D довольно условно, поскольку количество его, определяемое при помощи реактивов, может не соответствовать антирахитической активности. Причина этого лежит в том, что различные витамины D обладают неодинаковой биологической активностью; кроме того, существующие реакции, свойственные витамину D, не являются в полной мере специфичными.
В настоящее время в Советском Союзе начинает широко распространяться метод определения витамина, разработанный Биохимическим институтом Академии Наук СССР (с помощью прибора «вита-деметра» системы Шипалова). В основу метода положена реакция витамина D с треххлористой сурьмой (5). При проверке этого метода на стандартизованных препаратах витамина D заводская лаборатория 1 Московского витаминного завода (Татьянин, Чумакова) получила вполне совпадающие результаты. Приводим описание этого метода в том виде, как он используется в практике (6,7).
Определение витамина D в бензольных и 'масляных растворах с помощью витадеметра системы Шипалова
[Приготовление растворов д]л я анализа1
1. Бензольные растворы. Растворы, содержащие 1% облученного эргостерола, разбавляют хлороформом в 10 раз. Для определения берут по 0,2 мл разбавленного раствора. Реактив прибавляют непосредственно перед отсчетом в количестве 5 мл.
2. Масляные раств-оры. Концентраты, содержащие более 10 ООО
и. е., разбавляют хлороформом в 2—3 приема примерно до 10 000 и. е.
1 Реактив для определения витамина D готовят следующим путем: 22 г SbCl3 растворяют в 100 мл сухого хлороформа. Для более быстрого растворения смесь можно подогреть (до 40—45°). Если кристаллы сурьмы начнут желтеть, прекратить нагрев, охладить раствор, затем продолжать растворение. После растворения жидкость быстро фильтруется, к фильтрату добавляется 2 мл хлористого ацетила и раствор встряхивается. Если раствор не станет прозрачным, то необходимо добавить еще 2 мл хлористого ацетцла и оставить на 2—4 часа, а затем профильтровать. После этого раствор становится прозрачным.
витамина D Затем снова разбавляют хлороформом таким образом, чтобы со-депжание витамина Db растворе укладывалось в калибровочную кривую.
Высокоактивные концентраты можно разводить маслом примерно до 10 ООО инт. ед. (обязательно в 4—5 приема). Последний раствор разбавляют хлороформом.
Разведение нужно делать очень тщательно.
Проведение отсчетов
Витадеметр и гальванометр включают в сеть за 10—15 мин. до начала проведения отсчетов. Напряжение тока должно быть всегда одинаковым (6 вольт). Устанавливают нулевую точку гальванометра (витадеметр с гальванометром в это время не должны быть соединены) путем передвигания шкалы таким образом, чтобы «зайчик» падал на нуль шкалы. Затем три пробирки витадеметра наполняют реактивом. Одну из пробирок закрывают пробкой, помещают в правое гнездо витадеметра (следить за правильным положением кольца: выступ витадеметра должен соответствовать углублению кольца). Вторую ставят в левое гнездо, после чего при помощи ключа соединяют витадеметр с гальванометром, и движением винта диафрагмы приводят «зайчик» к нулю: затем отключают гальванометр, левую пробирку вынимают, взамен ее ставят третью пробирку, также закрытую пробкой. Гальванометр снова включают, отмечая положение «зайчика»: оно служит впоследствии для контроля.
