Иммунология. Том 2 - Дэвид Г.
ISBN 5-03-000497-1
Скачать (прямая ссылка):
BALB.K к BALB/c СЗН СЗН.А а СЗН А
В10 Ь C57BL/10 C57BL/10 C3H.SW Ь СЗН Swiss
В10.А а C57BL/10 А СЗН.В10 Ь СЗН C57BL/10
B10.D2 d C57BL/10 DBA/2 C3H.D d СЗН DBA/2
В10.М / C57BL/10 Outbred C3H.RIII г СЗН RIII
B10.BR к C57BL/10 C57BR
1 Список лабораторий, поддерживающих каждую из линий, приведен в работе [21].
2 Линия выведена в лаборатории автора.
мыши, чем любая другая особенность мышиной модели. Анализ создания конгенных по МНС и конгенных рекомбинантных линий позволяет оценить как преимущества, так и границы использования таких животных для иммуногене-тического анализа.
методов селективных скрещиваний; одна из наиболее удобных схем приведена на рис. 13.6. Начиная работу с двумя инбредными линиями, названными условно А и В, исследователь ставит себе задачу получить такую линию, геном которой был бы идентичен геному линии А по всем локусам, кроме главного локуса гистосовместимости, Н-2\ этот локус должен быть унаследован от линии В. Полученная линия будет названа А.В. В соответствии с приведенной схемой (рис. 13.6) две инбредные линии вначале скрещивают для получения гибридов Fj. Как отмечалось ранее, можно полагать, что обе линии гомозиготны по всем аутосомным локусам. Поэтому все локусы поколения Fj должны быть
Конгенные резистентные линии можно получать с помощью различных
Рис. 13.6. Схема получения конгепной линии (А.В).
Представлена система интеркроссов — бэккрос-сов, в которой селекция по генам гистосовместимости производится путем трансплантации кожи потомству каждого интеркросса и последующего отбора животных, отторгающих трансплантат родительской линии А.
X
I Повторение > Э циклов
гетерозиготными (аЪ). Животных Fx скрещивают между собой (интеркросс) и получают поколение F2. В этом поколении распределение аллелей по всем аутосомным локусам в идеальном случае соответствует биноминальному распределению. Для любого взятого наугад локуса ожидаемая частота животных генотипа bb составляет 1/4. Мышам F2 прививают трансплантат кожи или опухоли линии А. Животные, отторгнувшие трансплантат, хотя бы по одному локусу гистосовместимости должны иметь генотип bb. Очевидно, большинство животных этого поколения отторгнут трансплантат, так как локусов гистосовместимости очень много. Тем не менее, если отобрать только животных, у которых наблюдалось интенсивное отторжение, можно с уверенностью сказать, что тем самым проведена селекция гомозигот bb по локусу Н-2.
На следующем этапе проводят возвратное скрещивание мышей: мышей, отторгнувших трансплантат от линии А, скрещивают с животными линии А. Полученное потомство вновь будет гетерозиготно по интересующему нас локусу. Для всех остальных локусов (не подвергающихся селекции) вероятность гомозиготности (аа) будет равна вероятности гетерозиготности (ab) и составит 50%. Очевидно, что приблизительно 50% неселектируемой генетической информации в результате возвратного скрещивания ревертирует к инбредной линии А. В потомстве от возвратного скрещивания опять-таки проводят интеркросс, чтобы получить в поколении F2 ожидаемое распределение локусов, по которым ведется отбор. Животным F2 прививают ткань линии А и отбирают особей, активно отторгающих трансплантат. Процент особей, активно отторгающих трансплантат, в этом поколении будет меньше, чем в предыдущем. Отбор таких мышей является следующим циклом селекции гомозигот bb по локусу Н-2. Отобранных животных подвергают возвратному скрещиванию с линией А; в результате снова получают гетерозигот аЪ по локусу или локусам, по которым проводится селекция. Одна'ко на этот раз вероятность того, что какой-либо не подвергающийся селекции локус останется в гетерозиготной форме, снижается до 25%.
Этапы межлинейного скрещивания, интеркросса и отбора мышей, отторгающих трансплантаты, последовательно повторяют. После завершения девяти циклов можно ожидать, что среди потомков, полученных в результате интеркросса, расщепление будет идти только по одному локусу гистосовместимости, так что трансплантат будет отторгаться лишь у 25% потомков интеркросса. Учитывая, что в ходе селекции отбирали лишь животных с интенсивной реакцией отторжения, экспериментатор может с большой уверенностью полагать, что селекция проведена именно по локусу Н-2. Кроме того, вероятность, что какой-либо другой не подвергавшийся селекции локус остался гетерозиготным и не ревертировал в сторону гомозиготного генотипа аа, снижается до <0,2%. Другими словами, можно ожидать, что более 99,8% локусов, по которым отбор не проводился, идентичны соответствующим локусам линии А. Из последнего интеркросса выбирают гомозиготных самца и самку и из их потомства путем последовательного инбридинга получают конгенную резистентную линию А.В.
Гены млекопитающих передаются, как известно, в виде сцепленных групп в хросомомах. Поэтому в результате такого процесса в генах, тесно сцепленных с локусом, по которому проводится селекция, всегда остается какое-то количество генетической информации bb. Однако, как будет показано далее, происходящие при интеркроссах рекомбинации приводят к фиксации генотипа аа в локусах, расположенных в той же хромосоме, что и МНС (хросомома 17), хотя и на некотором варьирующем расстоянии от локуса Н-2. Для практических целей животных, прошедших по крайней мере девять циклов такого селективного размножения, принято считать конгенными.
