Методы анализа молока и молочных продуктов - Инихов Г.С.
Скачать (прямая ссылка):
учтены.
Для контрастирования некоторых препаратов применяют еще метод оттенения — осаждения на пленке слоя металла испарением его в вакууме. Атомы металла в глубоком вакууме разлетаются от места испарения по прямолинейным траекториям. Если под некоторым углом к направлению летящего пучка частиц поместить пленку с исследуемым веществом, то на ее поверхности отложится слой металла различной толщины. Для напыления используют проволочки диаметром около 5 мм из платины, палладия, вольфрама, хрома и нагревают до температуры, несколько ниже температуры их плавления.
При оценке электронных микроскопов наиболее важным является «разрешающая способность», которая дает раздельное изображение точек объектива, расположенных в непосредственной близости. Чем меньше расстояние между двумя точками, при котором они видны раздельно, тем выше разрешающая способность прибора. Разрешающая способность микроскопа ЭМ-3 выражается в 60 A, ЭМ-5 —в 20 A, УЭМ-100В — всего 8 А.
Рис. 5. Электронная пушка :
/ — анод; 2—нить катода; 3 — фокусирующий электрод; 4 — трансформатор накала нити (R сы— сопротивление смещения)-
18
Рис. 6. Электронный микроскоп ЭМ-5:
to™?0""8" ПУШКа: г~ «онденсорная линза; 3. 5. S и 11- полюсные на-№вдонион "™н™е4СТВЕЛ-Н0 к°ВДе^Р«™. объективной промежуточной „проекционной ЛИНЗ, ^-объектодержвтель; 6 - стигматор; 7 - объективная лии-щ,я H /8" Диафрагма; УР - поомежуточная линза: 72-провдионная '™3ваку^-проводЛЯРНЫЙ микР°ск°п: «-конечный экоан; /5- фо™еТа-
Электронный микроскоп ЭМ-5 (рис. 6) представляет собой настольную модель. Колонна микроскопа расположена вертикально. В верхней части находится электронная пушка, а на уровне стола — экран для наблюдения конечного изображения. За электронной пушкой сверху вниз расположено четыре электромагнитных линзы микроскопа: конденсорная, объективная, промежуточная и проекционная. Под экраном находится фотокамера. В столе микроскопа размещены вакуумные насосы и вся электрическая схема питания. Высокое напряжение, накал катода и напряжение смещения подведены к пушке бронированным высоковольтным кабелем.
Определение формы и размеров частиц казеина молока
В 1951 г. А. Хоштеттлер и Имхоф (Швейцария) установили, что средний размер коллоидных частиц казеи-наткальцийфосфатного комплекса составляет 840 — 1230 А. Форма их несколько измененная шарообразная. Некоторые фракции казеиновых частиц были величиной 0,780—0,051 мкм.
Препараты для электронного микроскопа приготовляют из свежего сборного молока. Его очищают от механических примесей и обезжиривают центрифугированием (3000 об)мин). Сливки удаляют, а молоко еще дважды центрифугируют и вновь удаляют сливки. В
Рис. 7. Прибор для изготовления коллоидной пленки:
/ — ванна; ? — сетка; 3 — сифон; 4— коллоидная пленка.
20
обезжиренное. Молоко добавляют раствор формалина и доводят его концентрацию до 0,08%. Молоко выдерживают в холодильнике при 5—7° С в течение суток. Затем его разбавляют в 300 раз дистиллированной водой (П. Дьяченко).
К этому времени готовят коллоидную пленку-подложку толщиной около 400—500А из 0,5—2,0%-ного раствора коллодия в амилацетате. Каплю такого раствора наносят на поверхность воды, налитой в ванночку (рис. 7). Предварительно на дно чашки опускают на стеклянной пластинке медную сетку (2—4 мм). Капля амилацетата быстро растекается по воде и после его испарения образуется тонкая пленка. Уровень воды в чашке постепенно (простым сифоном <5) понижают, пленка опускается на сетку. Затем ее подсушивают. Подложку с пленкой переносят на 1 сек в раствор с разбавленным исследуемым молоком, вынимают и помещают в эксикатор при 18— 20° С.
Высушенные препараты подтеняют хромом в вакууме распылительной установки (угол подтенения 14°) и держателем вносят в электронный микроскоп. Микросъемку производят при увеличении в 15—20 тыс. раз с последующим фотоувеличением в 2 раза. Фотоснимки получают с увеличением белковых веществ в 30—40 тыс. раз и по ним исследуют структуру частиц.
Микроскопирование натурального и плавленого сыров
Натуральный сыр (по Г. Тинякову). Кусочки сыра объемом около 1 мм3 фиксируют 1%-ной осмиевой кислотой (реактив 11) или четырехокисью осмия в аце-татвероналовом буфере при pH 7,2 на холоду до 3 ч, затем промывают в растворе Рингера (реактив 145) 30 мин и помещают в спирт в 70%-ный на 12 ч, в 96%-ный на 2 ч. Переносят на 5 мин в смесь обезвоженного ацетона и бутилметакрилата (1 : 1), на 1 ч в чистый бутил метакрилат и на 2 ч в смесь бутилметакрилата и метил метакр ил ата (4:1) с добавлением в качестве катализатора 1°/о-ной перекиси бензоила. Пробы заливают свежей порцией смеси бутилметакрилата и метилмета-крилата в отношении 9:1. Для заливки используют стандартные желатиновые капсулы (5X15 мм), которые помещают в термостат при 45—500C на 24 ч. После
21
полимеризации выдерживают при температуре 18—20° С в течение нескольких суток и производят срезы.
Срезы сыров толщиной 10—20 мкм получают при помощи конических сколов толстого зеркального стекла (стеклянных ножей). Срезы сбрасывают в ванну с 10— 20%-ным спиртом, переносят на сеточки с пленками и исследуют в электронном микроскопе. Для контрастности изображения применяют метод напыления на объект атомов тяжелых металлов.
