Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
специфическими, так и с гаплоид-специфическими фрагментами (дорожка
4). Во втором варианте опыта вы вносите в реакционную смесь
большой избыток немеченой ДНК, содержащей а-специфическую
последовательность, а также смесь белков а , и а2 • В этих условиях
гаплоид-специфический фрагмент тоже связывается (рис. 10-10, дорожка 5).
Аналогичным образом, если вы вносите в реакционную смесь избыток
немеченой гаплоид-специфической ДНК, a-специфический фрагмент все равно
связывается (дорожка 6).
"2 -а1 -
Немеченая а-специфическая ДНК - Немеченая галлоид-специфическая ДНК -
Гаплоид'специфическая -а-специфическая -
1 2 3 4 5 6 7 8
Глава 10
В третьем варианте опыта вы варьируете соотношение а, и а2.
Если а2 присутствует в избытке, то связывание гаплоид-спе-цифического
фрагмента уменьшается (рис. 10-10, дорожка 7), если же в избытке ах, то
снижается связывание с а-специфическим фрагментом (дорожка 8).
А. Находится ли а2 в присутствии а, в двух формах, различающихся по
специфичности связывания, или же в одной форме, которая может связываться
с обеими регуляторными последовательностями? Как с помощью ваших
результатов сделать выбор между этими двумя возможностями?
Б. Репрессор а2, несущий небольшую делецию в своем ДНК-связы-вающем
домене, не взаимодействует с фрагментами ДНК, содержащими гаплоид-
специфическую последовательность. Если, однако, этот мутантный белок
экспрессируется в диплоидной клетке одновременно с нормальными белками а2
и , то гаплоид-спе-цифические гены включены. (В норме эти гены в
диплоидны? клетках выключены-см. МБК, рис. 10-29). Что представляется вам
более вероятным в свете результатов, полученных в этом и других ваших
экспериментах: катализирует ковалентную
модификацию а2 или же ах модифицирует а2 в результата
стехиометрического взаимодействия с этим белком и образования комплекса
а1-а2?
10-18 Вы обнаружили новый штамм дрожжей, отличающийся по системе
спаривания. У дрожжей существуют два типа спаривания гаплоидных клеток,
получившие названия М и F. Клетки противоположных типов спаривания могут
сливаться с образованием диплоидных клеток М/F. В таких диплоидных
клетках могу! происходить мейоз и споруляция, но они не могут спариваться
друг с другом или с гаплоидными клетками одного из типов спаривания.
Проведенный вами генетический анализ нового штамма показал, что
у него имеются четыре гена, контролирующие тш спаривания. Когда в локусе
типа спаривания присутствуют генн Ml и М2, клетки относятся к типу
спаривания М. Если же в этом локусе находятся гены F1 и F2, то клетки
относятся к тип) спаривания F. Кроме того, вы идентифицировали набор
генов, специфически экспрессируемых в гаплоидных клетках М-тиш (Msg),
набор F-специфических генов (Fsg) и набор генов, специфических для
споруляции (Ssg). Получив мутанты, дефектные по каждому из генов типа
спаривания (все мутанты жизнеспособны), вы изучаете влияние этих генов на
фенотип спаривания и ш экспрессию различных наборов экспрессируемых ими
специфических генов. Ваши данные для гаплоидных и диплоидны! клеток,
относящихся к различным комбинациям мутантов, представлены в табл. 10-3.
Предложите схему регуляции продуктами генов Ml, М2, FI и F2
экспрессии М-специфических, F-специфических и специфй-; ческих для
споруляции наборов генов. Укажите, какие из продут ) тов генов являются
активаторами или репрессорами транскрипции и как действуют продукты этих
генов - по отдельности и/ил совместно.
10-19 Вы хотите узнать, остается ли транскрипционный комплев связанным с
ДНК в ходе ее репликации. Если бы связь сохраш ; лась, она могла бы
служить своеобразной биологической па ! мятью, позволяющей дочерним
клеткам наследовать родитель '
Рис. 10-11. t
разному мет 5S-PHK (А) активность I ции и при р 10-19). Макс чен заштрих
ный ген-бе} ками. Буква метилирова! к расщеплен обозначена : вость- знаке
транскрипто ных на нор макси-гене f стрелками (
Контроль генной экспрессии 175
Pic. 10-11. Чувствительность по-разному метилированных генов 5S-PHK (А)
и их транскрипционная апивносгь в отсутствие реплика-дни и при репликации
(Б) (задача
10-19). Макси-ген 5S-PHK обозначен заштрихованными, а нормаль-вый ген-
белыми прямоугольни-. ими. Буква М указывает, что цепь метилирована.
Чувствительность к расщеплению рестриктазой обозначена знаком ( + ),
устойчивость-знаком (-). Положение 11ранскриптов РНК, синтезированных на
нормальном гене и на макси-гене 5S-PHK, отмечено стрелками (Б).
Таблица 10-3. Фенотипы мутантов по типу спаривания у нового штамма
дрожжей (задача 10-18)
Мутант Феиотип Экспрессируемые
