Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел - Корниенко И.В.
ISBN 5-7509-0904-2
Скачать (прямая ссылка):
В последнее время широкое распространение получили системы видеосъемки электрофоретических гелей с цифровой записью и расшифровкой результата. В состав такой системы обычно входит персональный компьютер, цифровая видеокамера с объективом с переменным фокусным расстоянием, увеличивающей линзой и специальным УФ-фильтром, а также цифровая видеокарта для персонального компьютера.
В 124 ЦЛМКИ для этих целей используется компьютерная гель-документирующая система BioDoc Analyze (производство фирмы «Biometra»), имеющая чувствительную CCD камеру и программное обеспечение для качественной оценки и количественного анализа результатов электрофореза. Наличие светоизолирующего кабинета с трансиллюминатором позволяет проводить съемку даже в ярко освещенной комнате (рис. 26).
С помощью программного обеспечения устанавливаются контрастность и яркость полученного изображения (рис. 27), которое можно представить, как в виде негатива, так и в виде позитива (рис. 28).
Рисунок 26. Внешний вид компьютерной гель-документирующей системы BioDoc
Analyze
С помощью программы можно рассчитать размеры фрагментов выделенной ДНК, по заданным числовым параметрам размерного маркера, а по интенсивности полос можно получить информацию о количестве ДНК, содержащейся в заданной фракции (рис. 29).
Рисунок 27. Негативное изображение агарозного геля, полученное с помощью CCD камеры на приборе BioDoc Analyze
Таким образом, использование системы видеоизображения для анализа результатов электрофореза позволяет проводить не только визуализацию выделенной ДНК, а делать количественную оценку и определение молекулярной массы разделенных фракций, что, несомненно, в
конечном итоге сказывается на качестве моле кулярно-генетических экспертиз.
Рисунок 28. Позитивное изображение агарозного геля с разделенными
фракциями ДНК
Рисунок 29. Количество ДНК в интересующей фракции рассчитывается по интенсивности
свечения полосы
Литература
1. Cesarone С., Bolognesi С., Santi L. Improved microfluorometric DNA determination in bio-
logical material using 33258 Hoechst // Anal. Biochem., 1979. — Vol. 100. — P. 188-197.
2. Мое D., Garbarsh C., Kirkeby S. The protein effect on determination of DNA with Hoechst 33258 // J. Biochem. Biophys. Methods, 1994.
- Vol. 28. - P. 263-276.
3. Daxhelet G.A., Coene M.M., Hoet P.P., Coci-to C.G. Spectrofluorometry of dyes with DNAs of different base composition and conformation // Anal. Biochem., 1989. — Vol. 179. — P. 401-403.
4. Hoefer DyNA Quant™ 200 Fluorometer User Manual, 1997, Pharmacia Biotech.
5. Andersen J. Quantitation of DNA by slot-blot analysis. In: Methods in Molecular Biology, Vol. 98: Forensic DNA Profiling Protocols, Eds.: Lincoln P.J., Thomson J., Totowa, NJ, Humana Press, Inc., 1998, P. 33-38.
6. QuantiBlot Human DNA Quantitation Kit. Product Insert, Perkin-Elmer, 1996.
7. QuantiBlot Human DNA Quantitation Ver.1.0 // Armed Forces Institute of Pathology, DNA Identification Laboratory, Washington, 1998, P. 1-8.
8. Waye J.S., Willard H.F. Structure, organization, and sequence of alpha satellite DNA from human chromosome 17: evidence for evolution by unequal Crossing-Over and an ancestral pen-
tamer repeat shared with the human X chromosome // Molecular and Cellular Biology, 1986.
- Vol. 6. - P. 3156-3165.
9. Walsh P.S., Varlaro J., Reynold R.r A rapid chemiluminiscent method for quantitation of human DNA // Nucleic Acid Research, 1992.
- Vol. 20. - P. 5061-5065.
10. Исаенко M.B., Иванов П.Л. «Возможность верификации амплификационных профилей ДНК с помощью применения электрофореза в разных гелевых средах». Судебно-медицинская экспертиза, 2000, № 5, с. 32-37.
11. Заяц М.В., Фролова С.А., Иванов П.Л. Исследование электрофоретических свойств гелей высокоразрешающей агарозы MS-4 для разделения фрагментов ДНК в молеку-лярно-генетическом анализе. Судебно-медицинская экспертиза, 1997, № 4, с. 25-28.
12. Martin R. Gel electrophoresis: nucleic acids, Oxford: BIOS Scientific Publishers, 1996. — 175 p.
13. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование. — М.: Мир, 1984. — 480 с.
14. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. Под ред. Херрингтона С., Макги Дж. — М.: Мир, 1999. — 558 с.
15. Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. М.: Мир, 1982, 448 с.
16. Судебная фотография. Под ред. Дулова А.В. Минск: Вышэйшая школа, 1978. — 192 с.
17. Фотоаппарат «Зенит-ЕТ». Руководство по эксплуатации.
18. BioDocAnalyze Software. User's Manual. Bio-metra, 2000.
19. Photodocumentation. Ver.1.0 // Armed Forces Institute of Pathology, DNA Identification Laboratory, Washington, 1997, P. 1-6.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРИ РАБОТЕ С БИОЛОГИЧЕСКИМ МАТЕРИАЛОМ
1. Работа с биологическим материалом, как потенциально инфицированным материалом, способным длительное время сохранять и передавать вирусы иммунодефицита, возбудителей туберкулеза, гепатита В, С или другой возбудитель инфекции, должна проводиться в лабораторном халате, защитных перчатках и маске.
