Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
дом, благодаря которому каждая капля после образования будет отклоняться в предназначенный для нее контейнер. Поэтому оказывается возможным выбирать из потока два различных типа клеток, направляя их к положительно или отрицательно заряженным участкам сбора.
Несколько «омпаний участвуют в настоящее время в производстве такого оборудования, которое можно разделить на две главные группы: аналитические устройства, предназначенные для измерения рассеяния, поглощения и флуоресценции, и клеточные сортеры, предназначенные для разделения клеток по определенным свойствам.
Среди аналитических устройств простейшими являются машины с дуговыми лампами возбуждающего света, такие, например, как ICP22 и FACS Analyzer. Более сложные приборы дороги и характеризуются ограниченным числом полос возбуждения газовых лазеров, но они обладают высокоэнергетическими характеристиками источников света и, следовательно, вызывают более интенсивное флуоресцентное излучение используемых флуорохромов.
Все клеточные сортеры включают в себя один или два лазера для возбуждения и более сложные компьютерные устройства. Конструкции установок, поставляемых разными компаниями, существенно отличаются по устройству проточной камеры, предназначаемой для эффективной аналитической системы, жесткой, но легко управляемой (к таким машинам относятся 3Q50 и Spectrum, выпускаемые фирмой Ortho), или для более эффективного сортинга (наиболее широко известными машинами этого типа являются установки серии FACS фирмы Becton Dickinson). В создание и выпуск установок сходного типа вовлечены сейчас и другие компании, такие как Coulter и Partec. Каждая компания может предложить эффективную установку, отвечающую определенным требованиям, и в большинстве случаев точная формулировка этих требовании однозначно определяет выбор машины.
2.1. Ortho Diagnostic Sistems Inc.
Ортоцитофлуорограф l!S (Ortho Cytofluorograf1))
Цитофлуорограф IIS (рис. 6.1—6.3) состоит из четырех модулей.
2.1.1. Двухлазерный измерительный блок, модель FC210
Модель FC210 включает в себя два лазера, четыре детектора с предусилителями и регулировкой усиления, проточную
п Торговая марка.
ячейку, оптические фильтры, линзы и систему подачи образцов.
Лазеры. В стандартный комплект обычно входят 5-Вт аргоновый лазер и гелий-неоновый лазер со сверхнизким шумом, мощностью 0,8 мВт. Аргоновый лазер используется главным образом для возбуждения флуоресценции, но может быть также использован для измерений светорассеяния. Он обладает
Корпус главной чзс7И FC210
цифровой процессор данных 2103
Ьяон многопараметрмчеод* обравотии сигна-. лоб FC300 ?
^Предусилители
Оптичесний блом # своре крышка проточной ячейки
' Отклоняющие пластины сортера и держатель сосудов для свора франций
Аргоновый лазер
Гелий-неоновый лазер
Рис. 6.1. Цитофлуорограф системы 50Н с открытыми дверцами.
непрерывной регулировкой мощности и максимумами излучения при следующих длинах волн: 488; 514,5; 501,7; 457,9;
496,5; 418 и 351,1 нм.
Гелий-неоновый лазер используется для измерений с высоким разрешением поглощения света, а также рассеяния под малыми и широкими углами. Эти возможности обеспечивают измерение размеров клеток, использование нефлуоресцирующих «красителей и разделение клеток, основанное на различиях в коэффициенте преломления и гранулярности.
Аргоновый лазер мощностью 5 Вт может быть заменен на более дешевый аргоновый лазер мощностью 100 мВт.
Детекторы. Все детекторы, за исключением детектора поглощения света, использующего твердофазный сенсор, представляют ультраширокополосные высокочувствительные фотоэлектронные умножители (ФЭУ). Могут также поставляться четыре дополнительных детекторных ФЭУ. Каждый ФЭУ в сборе содержит фотоэмиссионный диод для калибровки. Вертикальная оптическая система фильтров обеспечивает выбор длины вол-
IVQ
~ укапал флуоресценции?4^
^Каизл флуоресценции! I
_ ^Маяоугловое рассеяние детек70№
Датчик для измерения саеюрассеяния под малым угярм
Датчик для
измерения
поглощения
Световоды и Фотоумножители
Отсекающие
фильтры
Рис. 6.2. Оптическая схема FC210. Обозначения: диагонально расположенные элементы — дихроические фильтры; перпендикулярно расположенные элементы — фильтры длин воли, поляризационные и т. д.; пунктиром обозначены дополнительные элементы.
ны света, к которой чувствителен детектор, и определение угла сбора света. Применяемая оптика обеспечивает сбор как флуоресцентного излучения, так и рассеянного возбуждающего света. В результате эта система может использовать как флуоресцирующие, так и нефлуоресцирующие красители.
В целом оптическая система располагает семью положениями детекторов. Использование волоконных оптических элементов для передачи оптических сигналов на детекторные ФЭУ значительно увеличивает универсальность и простоту использования системы.
Проточная ячейка. Проточная ячейка изготовлена из кварца и имеет плоские поверхности снаружи и внутри. Лазерные лучи пересекают образцы, протекающие внутри ячейки (не на воздухе).
