Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
Если кран переключен (штриховые линии), насос вытесняет соответствующий
объем пробы на колонку. Время включения, которое может быть задано с
клавиатуры контроллера прибора, и скорость подачи растворителя насосом
определяют объем, вводимой в колонку пробы. При объемной скорости
5 мл/мин и времени включения 0,1 мин этот объем составит 500 мкл. Таким
образом, капилляр для хранения образца объемом 25 мл- позволит провести
50 последовательных вводов пробы.
На рис. 3.42 и 3.43 изображен коллектор фракций. Прошедший детектор
элюат поступает в пространство, ограниченное цилиндрической стеклянной
стенкой. Конец капилляра может поворачиваться на 360°. Круг разделен на 6
или 12 сегментов, которые либо подсоединены к сливным отводам,
непосредственно ведущим в небольшие флаконы для сбора фракций, как
показано на рис. 3.43, либо могут быть подключены к большим емкостям
через соответствующие переходники.
Система ввода пробы и коллектор фракций контролируются
микропроцессором прибора. Пример, приведенный на рис. 3.44, показывает,
что программировать можно следующие
Аппаратура
Рис. 3.42. Коллектор фракций (с разрешения Hewlett-Packard Company).
Рис. 3.43. Коллектор фракций (с разрешения Hewlett-Packard Company).
функции: продолжительность ввода пробы, число повторных вводов, объем
вводимой пробы, моменты переключения коллектора фракций и длительность
одного цикла разделения. На рис. 3.44 показано, каким образом временная
программа препаративного разделения становится частью временной программы
прибора, контролирующей и такие функции, как формирование градиента.
Прибор, подобный описанному, принимая во внимание допускаемую им
возможность автоматически контролировать процесс разделения и
осуществлять последовательный ввод проб, способен нарабатывать очень
чистые соединения в больших количествах. При достаточных количествах
растворителя в резервуаре и пробы в капилляре такой прибор может работать
всю ночь.
В общем случае выбор условий разделения зависит от конкретной
задачи. Так, например, если имеется система фаз с высокой селективностью,
то можно вводить большие количества пробы, требования к эффективности
разделения (число теоретических тарелок колонки) невысоки, так что можно
использо-
1.00 1,04 2.00 315 3>5
16.00 12,50 12.80
13.00 13 20
14.80
15.40
17.80
18.40 18,70 19.10
20.00
25.00
26.00 стол
Рис. 3.44. Препаративное разделение.
Колонка: 250X8 мм с обращенной фазой С"; объемная скорость; 5 мл/мии;
объем пробы: 200 мкл1 температура: комнатная; подвижная фаза:
вода/ацетонитрил 5 70 об. к (гра диеитноё элюирование). В таблице показан
автоматический контроль ряда функций во времени.
Аппаратура 169
вать колонки, заполненные крупными частицами. И наоборот, если
разделение индивидуальных компонентов затруднено (малые значения а) и к
чистоте получаемых соединений предъявляются высокие требования
(необходимо высокое разрешение), разделение следует проводить на
колонках, заполненных частицами малого диаметра. Иногда в таких случаях
рекомендуется проводить разделение в две стадии: сначала на колонке с
малой эффективностью, а затем на колонке с высокой эффективностью.
Литература
1. Handbook of Chemistry and Physics, 57th Ed., D108-D112. Chemical
Rubber Co., Cleveland.
2. Daunderer Roth: Giftliste 2, Toxicologische Enzyklopaedie, ecomed.
3. Bakalyar S. R., Bradley М. P. Т., Honganen R. J. Chromatogr., 158,
277
(1978).
4. Brown J. N., Hewins M" van der Linden J. H. М., Lynch R. J. Publ.
No. 7042, 36,3877,11. Pye Unican Cambridge.
5. Schrender H. CZ-Chemie-Technik, 1, 73 (1972).
6. Schrenker H. Am. Lab., March, 1978.
7. Schrenker H. Simulations of Effect of flow-rate instabilities in
isocratic and gradient LC (not yet published).
8. Schoenmakers P. J., Billiet H. A. H., de Galan L. J. Chromatogr.,
185, 179
(1979).
9. Snyder L, R" van der Wal S. Anal. Chem., 53, 877 (1981).
10. Schmid A. Chromatographia, 12, 825 (1979).
11. Loreny H. Chemie-Technik, 6, 233 (1977).
12. Plein G. Labor Praxis, 3, 112 (1979).
13. Product Bulletin "Compact Glas Golumns", E. Merck, Darmstadt.
14. Techn. Bull. No. IM 182913 (1979). Waters Associates Inc.
15. Knox J. Laird G. R., Raven P. A. J. Chromatogr., 122, 129 (1976).
16. Golay M. J. E. J. Chromatogr., 240, 180 (1982).
17. Tweeten Т. частное сообщение.
18. Sisco W. R" Gilpin R. K. J. Chromatogr. Sci., 18, 41 (1980).
19. Chmielowiec J., Sawaizky H. J. Chromatogr. Sci., 17, 245 (1979).
20. Gant J. R" Dolan J. W., Snyder L. R. J. Chromatogr., 185, 153
(1979).
21. Melander W. R., Nahum A., Horvath C. J. Chromatogr., 185, 129
(1979).
22. Herbut G., Kowalszuk J. S. J.H.R.C. and CC, 4, 27 (1981).
23. Melander W. R" Horvath C., in: C. Horvath (Ed): High Performance
Liquid Chromatography: Advances and Perspectives, vol. 2, p. 192,
Academic Press, New York, 1980.
24. Perry J. (Ed.), in: Chemical Engineers Handbook, 4th Ed. McGraw Hill
