Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
Rheodyne Уплотнительная муфта, рас
стояние 4,5 мм6
1'32 (0,8) Valeo Уплотнительная муфта совме
(0,6) Hewlett-Packard стима со стандартным со
единением
(0,5) ANTEK (MICONN)
а Расстояние от конца уплотнительной муфты до конца капилляра.
(r) Используется только для подключения к дозирующему крану, на другом
конце капилляра может находиться система соединения любого нз упомянутых
выше стандартов.
Именно эта часть колонки и создает, как представляется потребителю,
их бесчисленное многообразие. Число различных вариантов систем торцевых
соединений практически соответствует числу фирм, выпускающих колонки, так
как последние могут различаться внешним диаметром, могут иметь внутреннюю
или наружную резьбу для подключения колонки и т. д.
Колонка подключается к системе ввода пробы и к детектору при помощи
капилляров. Так как очень часто приходится использовать колонки
различного производства, недостаток стандартизации в этой области создает
определенные трудности.
Капиллярные соединения, способные выдерживать высокие давления,
разрабатываются очень тщательно. Фирма Crawford (Swagelok) разработала
систему стандартов для них. К сожалению, существует много вариантов
соединений типа Swagelok, которые не полностью соответствуют этим
стандартам, поэтому пользователю следует выяснить, какими стандартами
руководствуется фирма, выпускающая колонки. В табл. 3.1 сведены данные о
наиболее важных стандартах на капиллярные соединения и указаны источники
этих сведений.
Следует подчеркнуть, что нельзя использовать попеременно различные
капиллярные соединения, так как при этом появляются течи, повреждаются
детали соединений и падает производительность.
120 Глава 3
3.5. Термостат колонки
Температура колонки - один из важных параметров процесса разделения,
который влияет на точность и длительность анализа, пределы обнаружения и
во многих случаях на селективность разделения.
Следовательно, температура колонки должна быть регулируемой в
диапазоне от комнатной до примерно 100 °С; необходимая температура должна
поддерживаться с точностью-±0,1-0,2 град.; термостатирование колонки
должно быть равномерным (не допускаются продольные и радиальные градиенты
температуры); в отсек для колонок должны легко устанавливаться колонки
различных размеров и краны для их подключения.
В дополнение к информации, приведенной в гл. 2, рассмотрим некоторые
практические приемы воздействия на температуру колонки с целью
оптимизации ЖХ-анализов (разд. 3.5.1- 3.5.3).
3.5.1. Стабильность температуры колонки и точность определения времени
удерживания
Согласно данным работы [18], в нормально-фазовой хроматографии
коэффициент емкости k изменяется в пределах до 10% при изменении
температуры на один градус. Если используется малорастворимый модификатор
(типа воды), равновесное распределение модификатора между неподвижной и
подвижной фазами устанавливается только при условии, что температура
колонки тщательно контролируется. В обращенно-фа-зовой хроматографии
влияние температуры не столь значительно, с изменением температуры на
один градус коэффициент емкости меняется на 2-3%, и при этом указанные
изменения тем заметнее, чем позднее элюируется соединение [19-21].
3.5.2. Температура колонки и длительность анализа
Во многих случаях изменение температуры колонки можно с успехом
использовать как средство ускорения анализа. С повышением температуры
коэффициент емкости k разделяемых соединений обычно (хотя и не всегда)
снижается. Кроме того, с повышением температуры может возрастать
эффективность колонки [22, 23], и одновременно точка оптимальной
эффективности сдвигается в область более высоких скоростей подвижной фазы
(этот сдвиг представляет практический интерес только для колонок,
заполненных частицами размером <10 мкм). С повышением температуры от
комнатной до 70 °С
Аппаратура 121
увеличение эффективности может составлять до 20-40%- Одновременное
уменьшение значения коэффициента k и увеличение эффективности колонки
приводит к значительному увеличению высоты пиков.
При увеличении температуры колонки снижается вязкость подвижной фазы.
Поэтому, если имеет место слишком высокое разрешение, анализ можно
ускорить путем увеличения объемной скорости подвижной фазы (одновременно
задается более высокий верхний предел давления на приборе).
3.5.3. Температура колонки и селективность
Степень влияния температуры колонки на коэффициент емкости k может
значительно различаться в зависимости от природы компонентов смеси, и эту
зависимость можно с успехом использовать для увеличения селективности
разделения. Убедительные примеры этого, демонстрирующие даже изменение
порядка элюирования соединений из колонки при умеренных изменениях
