Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
частично. Правильность работы и точность такой системы при ручном
управлении в основном зависят от навыков оператора. Это же относится и к
эффекту размывания полосы пробы, наблюдаемому при работе со шприцем и
краном. Следовательно, система данного типа должна быть полностью
автоматизирована, как это показано на рис. 3.12, поскольку при этом
исключаются потенциальные ошибки оператора.
8-1489
114
Глава 3
Если управление хроматографом осуществляется вручную, более
предпочтителен кран для ввода пробы, петля при этом заполняется целиком,
и вся находящаяся в ней проба вводится в колонку. Краны для ввода пробы с
внутренними и внешними петлями выпускаются различными фирмами. К числу
преимуществ этих устройств относятся также высокая точность и
воспроизводимость при ручном управлении, а к числу их недостатков -
необходимость смены петель для ввода различных объемов пробы. Кроме того,
перед каждым вводом пробы петлю необходимо промывать избытком пробы,
чтобы избежать ее разбавления, что является недостатком при работе с
малыми количествами анализируемого образца.
3.3.3. Автоматические системы ввода пробы
На рис. 3.12 показана схема автоматической системы ввода пробы, в которой
используется петля для ввода пробы. В положении, показанном на рисунке,
растворитель поступает непосредственно на колонку, в то время как
измерительный шприц подсоединен к флакону с пробой. Дозирующая петля
Аппаратура 115
может оканчиваться прочной иглой, способной перемещаться вверх и вниз под
действием пневмопривода. Приводимый в действие электромотором шприц
отбирает определенный объем пробы в петлю. После этого иглу поднимают,
флакон с пробой убирают, а игла опускается вниз и прижимается к
металлическому уплотнению. При переключении крана в положение "Ввод",
осуществляемом пневмоприводом или электромотором, поток растворителя
направляется по входам 1 и 2 через петлю, вымывая пробу через входы 5 и б
на колонку. Во время этой процедуры проба может поступать в канал между
входами 5 и 4 вследствие диффузии. Во избежание загрязнения пробы кран
перед каждой последующей процедурой заполнения петли открывается на очень
короткое время и небольшой поток растворителя вымывает остатки пробы из
системы через входы 5 я 4.
Система ввода пробы, показанная на рис. 3.12, может быть легко
полностью автоматизирована путем добавления устройства, транспортирующего
флаконы с пробами в положение, из которого проба отбирается в петлю.
Подобные системы, в которых флаконы находятся в штативах или
последовательна расположенных держателях, способны принимать 100 и более
образцов, анализируемых без участия оператора.
3.4. Хроматографическая колонка
Хроматографические колонки, предназначенные для ВЭЖХ представляют собой
снабженные торцевыми соединениями трубки, заполненные тонкозернистым
упаковочным материалом (насадкой).
3.4.1. Трубки, используемые для изготовления колонок для ВЭЖХ
Большинство колонок для аналитической ВЭЖХ изготавливают из нержавеющей
стали марки 316 - стального сплава, соответствующего стандарту США,
определенному Американским институтом стандартов в промышленности (AISI).
Этот сплав обладает отличной устойчивостью к коррозии. Все металлические
детали хроматографической системы, контактирующие с жидкостью, должны
быть сделаны из этого сплава.
Качество обработки внутренних стенок трубки должно отвечать
определенным требованиям. Как правило, степень шероховатости стенок,
которая определяет качество их обработ ки, должна быть меньше одной
десятой среднего размера ча стиц материала, заполняющего колонку. Это
означает, чтг шероховатость поверхности должна быть меньше 0,5 мкм, еаш
колонка заполнена носителем с размером частиц 5 мкм.
8*
116 Глава 3
Чтобы снизить шероховатость трубок, их футеруют стеклом, полимерами,
золотом, тем не менее следует отметить, что упомянутые стальные трубки
являются вполне удовлетворительными. В последнее время распространение
получили стеклянные трубки [12, 13]. Их преимущество - очень высокое
качество поверхности стенок. В то же время конструирование торцевых
соединений для таких трубок сопряжено с определенными проблемами.
Приемлемое решение было предложено фирмой Merck [13].
Фирма Waters [14] использует для изготовления радиально сжимаемых
колонок полиэтиленовые трубки. Эти колонки помещают в рубашку, в которой
на них подается внешнее давление, что вызывает радиальное сжатие колонок,
улучшающее их разрешающую способность и повышающее стабильность.
Для изготовления хроматографических колонок используют трубки
внутренним диаметром от 4 до 8 мм, от 2 до 4 мм и от 1 до 2 мм. Колонки
первой группы классифицируются как полупрепаративные, второй группы - как
аналитические и третьей группы - как микроколонки.
Эти названия колонок определяют область их хроматографического
применения. От правильности выбора внутреннего диаметра колонки зависят
результаты разделения. Колонки всех перечисленных выше диаметров
