Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
посредством кривошипно-шатунно-
го механизма.
Создает постоянный поток (если правильно компенсировано скатывание) с
пульсациями средней величины (требуется демпфер для сглаживания
пульсаций); объемная скорость определяется частотой хода поршня, обычно
0.02, .... 2 Гц; быстрое заполнение путем увеличения скорости вращения
мотора на фазе впу-ска.
и отверстием для подачи масла
подачи масла
Рис. 3.7. Диафрагменный насос с одной головкой и приводом посредством
кривошипно-шатунного механизма.
Движение поршня передается в вытеснительную емкость насоса посредством
масла и гибкой стальной диафрагмы: создает
постоянный поток (при наличии линии обратной связи); частота хода поршня
постоянна (5... 10 Гд); объемная скорость определяется регулировкой
величины рабочего хода поршня; эффективное гашение пульсаций
увеличивается постоянной и высокой частотой хода поршня.
Аппаратура
10)
Вывод
растворителя
Насос высокого давления
Нотор с переменной
скоростью
Балансировочный | контроллер С
Ввод
1 растворителя
Рис. 3.8. Двухстадийный воз-вратно-поступательный насос. Метрический
насос низкого давления определяет объемную скорость; насос высокого
давления (вторая стадия), который управляется балансирующим насосы
контролером, создает необходимое рабочее давление: работа впускного и
выпускного клапанов метрического насоса синхронизирована с работой
привода.
рый "проглатывает" часть объема жидкости, подаваемой насосом во время
одного рабочего хода, и впрыскивает его в колонку в то время, когда насос
заполняется.
3.2.3. Смешение растворителей и системы формирования градиента
В ЖХ очень часто подвижная фаза представляет собой смесь двух и более
растворителей, соотношение которых легко изменить в процессе анализа
согласно заданной программе (градиентное элюирование). Таким образом, в
системе подачи растворителя должен быть предусмотрен контроль за
соотношением растворителей.
110 ГЛД:<1 3
3.2.3.1. Состав подвижной фазы, стабильность и точность анализов.
Влияние точности соблюдения необходимого соотношения компонентов
подвижной фазы на результаты качественного и количественного анализов,
осуществляемых методом ЖХ, не столь очевидно, как влияние стабильности
потока, особенно при градиентном элюировании. Для заданных неподвижной
фазы и исследуемой пробы состав (и природа) подвижной фазы определяет
равновесное распределение образца между фазами и, таким образом, влияет
на коэффициент емкости k, который в свою очередь определяет время
удерживания tR. В литературе (см., например, [8, 9]) приводятся
многочисленные данные, описывающие зависимость коэффициента емкости от
состава подвижной фазы в обращенно-фазовой хроматографии. Как правило,
изменение состава подвижной фазы на 1 % в условиях изократического
элюирования (возможны также большие или меньшие изменения) приводит к 3-
10%-ному изменению времени удерживания.
Если проводится градиентное элюирование, отклонение действительного
состава растворителя от запрограммированного обычно оказывает большее
влияние, особенно на заключительной стадии процесса. Более того,
требования к точности воспроизведения состава элюента возрастают с
уменьшением длины колонки, уменьшением крутизны градиента и увеличением
скорости подачи подвижной фазы [7].
3.2.3.2. Типы систем смешения растворителей и формирования
градиента. Для автоматического смешения растворителей и создания
градиента используют два следующих метода:
а. Каждый из растворителей подают при помощи отдельного насоса с
контролируемой производительностью. Подаваемые этими насосами
растворители смешиваются в смесительной камере малого объема. Объемное
соотношение растворителей в получаемой смеси определяется соотношением
объемных скоростей растворителей Fu F2,..., подаваемых насосами Р\, Р2, .
¦и суммарной объемной скоростью подачи'всех растворителей'(рис. 3.9):
Растворитель k= (/VE.Fi) 100, об. %
Для того чтобы соотношение растворителей в смесях, получаемых таким
способом, соответствовало требуемому (получаемому в емкости путем
смешения соответствующих объемов растворителей), контроллер объемной
скорости должен быть отградуирован по объемным скоростям поступления
растворителей в насосы.
б. Вход насоса через систему распределительных клапанов, работающих
в режиме разделенного времени, соединен с емкостями для растворителей 1,
2..т. е. насос последовательно
Аппаратура 111
Контроллер скорости 2 ч
Растворитель 2,об.%-
fV100
Ч г2
e-J Контроллер Программатор состава градиента Контроллер
скорости 1 (дополнительна
Растр?" - TeiL> 1 Растворитель 2
Рис. 3.9. Пример устройства для смешения двух растворителей.
Два насоса с контролируемой объемной скоростью определяют соотношение
растворителей й элюенте (об. %).
Интервал
открывания
клапана
Растворителе Рвстворитель2 Растворитель 3 Рис. 3.10. Пример
устройства для смешения трех растворителей.
