Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
чувствительности и селективности обнаружения порфиринов с существенно
различным положением максимумов испускания, например, прото- и Zn-
протопорфиринов (табл. 10.1) [71].
По флуоресцентным спектрам возбуждения и испускания элюируемых
фракций, получаемых по методу прерывания потока, можно осуществить
идентификацию отдельных порфиринов
[36].
10.4.2.1. Обнаружение по второй производной сигнала флуоресцентного
детектора. Авторы работы [72] предложили интересный подход, основанный на
определении второй производной интенсивности сигнала детектора по
флуоресценции. Этот под-
520 Глава 10
Митохондрия
гем
Гли * Сукцинил-СОА (c)
I(DV~55^,'
прогопорфирин
кйслота°^/',ЛИНОВаЯ Протопорфириноген
Порфиринобилиноген КопропорфириногенЖ
УропорфирииогенШ Уропорфириноген I
Цитоплазма
J(c)
Рис, 10.20. Схема биосинтеза гема.
1 - 6-аминолевуленат-сннтаза; 2 -
порфобилиноген-синтаза; 3 - уро-
порфобилиноген-синтаза; 4 - уро-
порфнриноген-косинтаза; 5 - уро-
порфнриноген-декарбоксилаза; 6 - копропорфнрнноген-оксндаза; 7 -
протопорфнрниогеи-оксндаза; 8- фсррохелатаза.
ход был применен для определения эфиров порфиринов, выделенных из
культуры клеток печени эмбрионов цыплят. Элюат, содержащий разделенные на
колонке с партисилом 5 эфиры порфирина, контролировался флуориметрически
(длина волны возбуждения 405 нм, испускания 430 нм). Вторая производная
была получена при помощи ЭВМ из исходной хроматограммы нулевого порядка
(рис. 10.19). Вторая производная хроматограммы увеличивает разрешение
пиков и чувствительность обнаружения, последнее, впрочем, справедливо
только для пиков с большой или, напротив, с маленькой высотой, как
показано на примере метилового эфира уропорфирина (рис. 10.19).
10.5. Применение ВЭЖХ для диагностики порфирий
Подробные сведения о заболеваниях порфириями приведены в медицинской
литературе [73, 74]. Клинические симптомы позволяют только установить
общий характер заболевания, так как отдельные формы порфирий имеют
сходные признаки, как, например, различные формы острой гепатической
порфирии. Однако чтобы правильно вести лечение этих заболеваний, их
необходимо дифференцировать.
10.5.1. Состав порфиринов при порфириях
Причина возникновения порфирии - пониженная активность фермента (или
фактора) биосинтеза гема. Недостаточность фермента приводит к повышенному
синтезу 6-аминолевулиновой кислоты, контролируемому по механизму
отрицательной обратной связи (рис. 10.20). Это в свою очередь приводит к
избыточному синтезу предшественников порфирина и порфириноге-нов,
расположенных в биосинтетическом пути на этапе, предшествующем
ферментативному блоку. Накапливающиеся пор-фириногены обнаруживаются в
моче и (или) кале и окисляются там до соответствующих порфиринов, тогда
как предшественники порфирина выделяются только с мочой.
Порфирины 521
Таблица 10.2. Снижение активности ферментов при заболевании порфирией и
содержание порфиринов
Вид порфирнн Ферменты, актив 1 Увеличение содер
, СО (в
0>"? жания порфиринов
-ill
ж я со
ас ас н
0# се о
ность которых сни Увелнч в моче в кале в крови &S&S
жается содерж о -s 1
предше Soon.
киков s *
I. Печеночная Уропорфирино- Нет +-++ + Нет
10.10,
P. cutanea tar
da ген-декарбокси- Нет ---(- Нет ---Ь Нет "
10.22
Острая интер лаза
10.11
Уропорфобили-
миттирую ноген-синтаза Нет ++ Нет ---|- + "
10.13
щая Протопорфирино-
P. variegata
Врожденная ген-оксидаза, Нет ++ + + "
10.5
феррохелатаза
Копропорфири-
II. копропор- ноген-оксидаза Нет 1 + +
10.6
фирия Уропорфирино-
