Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
330
Токоферолы а, р, у, 6 Сферисорб (5 мкм) пар- 1,4%
изопропанола в гексане Флуоресценция, 23
Кораснл (предколонка) и
340
тиснл PXS-5
Токоферолы а, р, '(, б Лихросорб SI-60 (5 мкм) 5%
диэтилового эфнра в гек 292; флуоресцен 24
Токотриенолы а, р, у сане
ция, 330
Токоферолы, УХ, витамины А, К Нуклеосил Cis
С2Н50Н/Н20 или изопропанол/ УФ 28
Партисил ODS /гексан
Лихросорб диол
Витамин Е-хиноны, токоферол. Бондапак Cie 100%-ный
ацетонитрил 254 20
хинон Лихросорб SI-60, диаметр 0,5%
изопропапола в изоокта 296 19
Токоферолы а, Р, у, 6, витамины 16 мм (препаративная) не
Порасил Дихлорэтан/гептан (6:9) 254
29
Бондапак Си СНзОН/изопропанол (3: 1) Переменная
4
Лихросорб SI-10
Токоферолы а, а-ТХ, УХ-9, 10, Лихросорб RP-8 (5 мкм) мкм),
СНз0Н/Н20 (градиентное 285,5 21
витамины Ki, ПХ-9, ПХ-Н2, хло Партнснл ODS (10 мкм)
элюирование) 275
рофиллы, каротиноиды Сферисорб ODS (5
СН3ОН/Н2О (87: 13 или гра
Токоферолы а, у, а-ацетат токо- 15 см диентное
элюирование)
хинона
392
Глава 7
5 0,007 3
§ 0,001 О
J_____. I
t.MMH
10 15
t,MHH
Рис. 7.5. Разделение токофероловых и токотриеноловых стандартов [24].
Неподвижная фаза: лихросорб SI-60, 5 мкм; элюеат: 5%*ный диэталовый эфир
в гекса-не; объемная скорость: 2 мл/мин; обнаружение: детектор по
флуоресценции (а) (возбуждение при 290 нм н испускание при 330 нм) и УФ-
детектор (б) (при 295 нм).
/ - а-токоферел; 2 - а-токотриенол; .? - р-токоферол; 4 - антиоксидант
ВНА; 5 - у-токо-ферол; 6 - 0-токотраенол; 7 - у-токотрненол; 5 - 6-
токоферол.
(Cjs) или "нормально-фазовой" (силикагель, NH2) хроматографии.
Обнаружение в большинстве случаев осуществляют УФ-де-тектором при длине
волны 320 и 365 нм [32-39, 150].
7.3. Жирные кислоты
Для разделения сложных смесей жирных кислот и их метиловых эфиров чаще
всего используют газовую хроматографию [40, 41]. Однако разработанные к
настоящему времени методики ВЭЖХ, как выяснилось, также могут применяться
в этих целях (табл. 7.4). Одна из важнейших проблем, связанных с
применением ВЭЖХ в этой области, - это проблема обнаружения и определения
концентраций жирных кислот и родственных им липидов. Наибольшее
распространение в этой области получили дифференциальный рефрактометр и
УФ-детектор. Автор работ [42, 43] изучал разделение метиловых эфиров
насыщенных и ненасыщенных жирных кислот на колонке с корасилом Cie при
обнаружении их дифференциальным рефрактометром. Если элю-ентом служила
смесь ацетонитрил/вода, ненасыщенные жирные кислоты элюировались раньше,
чем соответствующие кислоты с меньшей степенью ненасыщенности, а ц"с-
изомеры - раньше, чем соответствующие транс-изомеры. Авторы [44]
разделили сложную смесь растительных масел на жирные кислоты и три-
Рис. 7.6а. Разделение диэфиров жирных кислот и 1,3-бис-(2-гидро-ксиэтил)
-5,5-диметилгидантоина (ДМГ) [45].
Неподвижная фаза: лихросорб RP-8, 5 мкм; элюент: СНз0Н/Н20 (93:7);
объемная скорость: 1 мл/мии; обнаружение: рефрактометрическое.
Число атомов С
Рис. 7.66. Зависимость logfe от природы эфира и числа атомов углерода в
жирнокислотном остатке [45].
Условия разделения см. в подписи к рис. 7.6а.
1 - изооктиловые эфиры; 2 - к-гексиловые эфиры; 3- изобутиловые эфиры; 4
- изопропиловые эфиры; 5 - метиловые эфиры; 6 - триметилцропиловые
триэфиры; 7 - диметил-гидаитоиновые диэфиры; # - тетраэфнры
пеитаэритрита.
Таблица 7.4. Анализ жирных кислот при помощи ВЭЖХ
Обнаружение (тип производного Неподвижная фаза и колонка
Элюент Примечания Литература
и длина волны)
